Николь крупина: Nicole Krupina | Facebook

«Зе, похоже, по пути Велика пошел». Фанаты «Спартака» усомнились в травме игрока

За то время, пока его сборная Кабо-Верде дважды за пять дней обыгрывала ЮАР, футболист вроде успел прийти в себя и даже приступить к тренировкам в общей группе. Но, вот незадача, опять получил травму. Да какую! Растяжение мышц живота. Восстановление по предварительным данным займет еще порядка двух недель. За это время «Спартак» и с «Рубином» сыграть успеет, и в Лиге чемпионов стартовать.

«Может блефуют»?

Все вроде обыденно… Только болельщики «Спартака» к вести о травме отнеслись скептически. Уж больно необычный для полевого игрока диагноз. Вот фанаты и заподозрили что-то неладное у футболиста, которые не вылезает из клубного лазарета.

«Зе, похоже, по пути Велика пошёл. Жаль. Теперь мышцы живота потянул. Еще две недели пауза», — вспоминает в гостевой книге фанатов «Спартака» дважды лучшего бомбардира чемпионата России Веллитона пользователь под ником ogonek.

«Первый раз такое слышу. Как можно потянуть мышцы живота, да еще на две недели? В каком упражнении?» — недоумевает kvzakhar.

«У Зе столько травм, что поневоле начнешь считать, что дуркует футболист. Ибо подозрительно», — считает Eaglesias.

«Две недели это еще минимум. Обычно дольше. Другое дело, что травма такого вида для профессионального спортсмена – нонсенс. Для беременной женщины или пенсионера – да. Может блефуют?» — спрашивает Paraschut.

«Сразу после матча с конями Зе был замечен в одном из ресторанов Москвы в офигенно (грубо) веселом настроении со всеми «атрибутами»… Неприятно поразило! Походу, у парня здесь жизнь удалась!» — делится наблюдениями Леонидыч.

«Ну не зря здесь было фото из Инстаграма некой Крупиной в обнимку с Зе. Контракт переподписан, жизнь удалась, по стопам Веллика», — пишет vital_23.

«С такой подругой не мудрено «травмироваться» постоянно. Вступил на скользкую дорожку, походу. Жалели по началу его. С ребенком там проблемы какие-то, не до футбола ему…. А тут раз и все в порядке сразу», — возмущается mp.

Доведут до цугундера

Если вы не поняли, о чем идет речь в последних двух сообщениях, объясняем… Болельщики «Спартака» имеют в виду это фото, на котором Зе, отложив в сторону бокал с пивом, позирует с двумя девушками.

Одна из них – некая Николь Крупина. Позже, уже в истории той же социальной сети, появилось фото, на которой Зе обнимает девушку не в клубе, а при свете дня. Фото было опубликовано с аккаунта самого Зе.

Вот, кстати, девушка с футболистом. Судя по всему, действие происходит в квартире игрока.

А ведь дома футболиста ждут супруга и ребенок. Некрасиво как-то получается.

Но, хватит этой Санта-Барбары. Вернемся к травме. Болельщики не правы. Растяжение мышц живота для футбола дело вполне привычное. Вот только страдают от таких повреждений чаще вратари, вынужденные вытягиваться в струнку во время сейвов. У полевых игроков такие травмы и правда в диковинку. Последний раз в «Спартаке» нечто подобное было в 2013 году, когда на три недели из строя выбыл бразильский защитник Жоао Карлос.

«Зе, похоже, по пути Велика пошел». Фанаты «Спартака» усомнились в травме игрока

В «Спартаке» и так с нападающими не все в порядке, а тут еще и основная ударная сила красно-белых впереди, Зе Луиш, выбывает на две недели.

За то время, пока его сборная Кабо-Верде дважды за пять дней обыгрывала ЮАР, футболист вроде успел прийти в себя и даже приступить к тренировкам в общей группе. Но, вот незадача, опять получил травму. Да какую! Растяжение мышц живота. Восстановление по предварительным данным займет еще порядка двух недель. За это время «Спартак» и с «Рубином» сыграть успеет, и в Лиге чемпионов стартовать.

«Может блефуют»?

Все вроде обыденно… Только болельщики «Спартака» к вести о травме отнеслись скептически. Уж больно необычный для полевого игрока диагноз. Вот фанаты и заподозрили что-то неладное у футболиста, которые не вылезает из клубного лазарета.

«Зе, похоже, по пути Велика пошёл. Жаль. Теперь мышцы живота потянул. Еще две недели пауза», — вспоминает в гостевой книге фанатов «Спартака» дважды лучшего бомбардира чемпионата России Веллитона пользователь под ником ogonek.

«Первый раз такое слышу. Как можно потянуть мышцы живота, да еще на две недели? В каком упражнении?» — недоумевает kvzakhar.

«У Зе столько травм, что поневоле начнешь считать, что дуркует футболист. Ибо подозрительно», — считает Eaglesias.

«Две недели это еще минимум. Обычно дольше. Другое дело, что травма такого вида для профессионального спортсмена – нонсенс. Для беременной женщины или пенсионера – да. Может блефуют?» — спрашивает Paraschut.

«Сразу после матча с конями Зе был замечен в одном из ресторанов Москвы в офигенно (грубо) веселом настроении со всеми «атрибутами»… Неприятно поразило! Походу, у парня здесь жизнь удалась!» — делится наблюдениями Леонидыч.

«Ну не зря здесь было фото из Инстаграма некой Крупиной в обнимку с Зе. Контракт переподписан, жизнь удалась, по стопам Веллика», — пишет vital_23.

«С такой подругой не мудрено «травмироваться» постоянно. Вступил на скользкую дорожку, походу. Жалели по началу его. С ребенком там проблемы какие-то, не до футбола ему…. А тут раз и все в порядке сразу», — возмущается mp.

Доведут до цугундера

Если вы не поняли, о чем идет речь в последних двух сообщениях, объясняем… Болельщики «Спартака» имеют в виду это фото, на котором Зе, отложив в сторону бокал с пивом, позирует с двумя девушками.

Одна из них – некая Николь Крупина. Позже, уже в истории той же социальной сети, появилось фото, на которой Зе обнимает девушку не в клубе, а при свете дня. Фото было опубликовано с аккаунта самого Зе.

Вот, кстати, девушка с футболистом. Судя по всему, действие происходит в квартире игрока.

Но, хватит этой Санта-Барбары. Вернемся к травме. Болельщики не правы. Растяжение мышц живота для футбола дело вполне привычное. Вот только страдают от таких повреждений чаще вратари, вынужденные вытягиваться в струнку во время сейвов. У полевых игроков такие травмы и правда в диковинку. Последний раз в «Спартаке» нечто подобное было в 2013 году, когда на три недели из строя выбыл бразильский защитник Жоао Карлос.  

Горшок

 А послухай-ко, што в нашей стороны деетца. Этаких леных-то поискать да и поискать… Так и норовят дило-то на чужи плечи столконуть — самому бы только не дилать. Вот этаки-то муж с женой и жили у нас в деревне. Уж таки лены, таки лены были изо всей округи. И дверь-то в избу николи на крюк не закладывали… «Да притка ево возьми!.. Утром-то вставай, да руку и протягивай, да упять ево скида-вай… Да и так живе!»

Вот этака-то баба и свари каши… А уж и каша задалась! Румяна да рассыпчата, крупина от крупины так и отвалилася. Выняла этта баба кашу из печи, на стол поставила, маслицем сдобрила, съили кашу облизаючись. Глядь, а в горшке-то этак сбочку да на донышке и приварись каша-то, мыть горшок-то надобно. Вот баба и говорит мужику:

— Ну, мужик, я свое дило сдилала — кашу сварила, а горшок теби мыть!

— Да полно-ко! Мужиково ли дило горшки-то мыть?! и сама вымоешь!

—А и не подумаю!

—А и я не стану…

— А не станешь — дак и так стоит!..— Сказала баба, сов горшок-то на шесток, а сама на лавку… Стоит горшок не мытой…

— Баба, а баба! а вить горшок-то не мытой стоит…

— А чья череда — тот и мой, а я не стану…

Достоял горшок до ночи… Ладит мужик спать ложитца, лезет на печь-то, а горшок все тутотка.

— Баба, а баба! надобно горшок-то вымыть!

Взвилась баба вихорем:

— Сказано — твое дило — ты и мой!..

— Ну, вот што, баба! уговор дороже денег — кто завтра первой встанет, да перва слово скажет — тому и горшок мыть!..

— Ладно, лезь на печь-ту, там видно буде!..

Улеглися. Мужик-то на печи, баба на лавки. Прошла темна ноченька… Утром-то никто и не встае!.. Ни тот, ни друга и не шелохнутца — не хотя горшка-то мыть. Бабы-то надоть коровушку поить, доить да в стадо гнать, а ена с лавки-то и не крятатца… Этта соседки коровушек-то прогнали…

— Господи помилуй! што это Маланьи-то не видать… Уж все ли по здорову?!

— Да, быват, позапозднилась… обратной пойдем — не встретим ли…

И обратно идут — нет Маланьи…

— Да нет уж!.. видно, што приключилося!

Ближняя-то суседка и сунься в избу… Хвать! и дверь не заложена… Не ладно штой-то!.. Вошла, перехрестилась.

— Маланья, матушка!..

Ан, Баба-то лежит на лавке… во все глаза глядит, сама не шелохнетца…

— Пошто коровушку-то не прогоняла? Ай понездоровилось?

Молчит баба…

— Да штой-то с тобой приключивши-то? Почто молчишь-то?!

Молчит баба, што зарезана…

— Господи помилуй?! Да где у тя мужик-то?! Василий… а Василий!..

Глянула на печь-то — а Василий тамотко лежит… глазы открыты, а не ворохнетца…

— Што у тя с женкой-то?! Ай попритчилось?..

Молчит мужик, што воды в рот набрал… А эфто, вишь ты, никому горшка мыть не охота, не хотя перво словечушко молвить… 

Всполошилась суседка.

— Оборони, Господь, не напущено ли!.. Пойтить сказать бабам-то…

Побежала по деревни-то.

— Ой, бабоньки! не ладно вить у Маланьи-то с Василием… Пойди-тко, погляди — лежат пластом одна на лавки, другой на печи… Глазыньками глядят, а словечушка не молвят… Уж не порча ли напущена?!

Прибежали бабы, почитай все собралися. Лоскочут коло Маланьи да Василия.

— Матушки! да што это с вам подеялось-то?.. Маланьюшка!.. Васильюшко!.. Васильюшко… Маланьюшка… Да пошто молчите-то?! Што приключивши-то?!

Молчат… молчат обое, што убитые.

— Да беги-тко, бабы, за попом! Отчитывать надобно… Дило-то оно совсим неладно выходит.

Сбигали. Пришел батюшко-то.

— Што тако, православные?..

— Да, вот, батюшко, штой-то попритчивши. Лежат обое — не шелохнутца… Глазыньки открыты, а словечушка не молвят… Уж не попорчено ли? Не отчитывать ли?

Батюшко бороду расправил, да к печки:

— Василий! раб Божий! Што приключивши-то?..

Молчит мужик… Поп-то к лавки.

— Раба Божия! Што с мужем-то?..

Молчит баба…

— Да уж не отходну ли читать? Не за гробом ли спосылать?

Молчат, што убитые…

Бабы-то этта полоскотали, полоскотали, да и вон из избы-то. Дило-то оно не стоит… кому печка топить, кому ребят кормить… у ко-во цыплятка, у ково поросятка… А батюшко-то:

— Не-е, православные, уж этак-то оставить их боязно… Уж посидите кто-нибудь.

Той нековда, другой нековда, энтой времячка нет…

— Да вот,— говорят,— бабка-то Степа-нида пущай и посидит… Не ребята и плачут… Одная и живе…

А эта-ка бабка Степанида рученкой подперлась, поклонилась.

— Да не-е, уж, батюшко… нонече даром-то никто работать не стане. А положь жалованье, так посижу…

— Да како же те жалованье-то положить? — спрашивает батюшка. Да повел этак глазам-то по избе… А у двери-то и висит на стенки рва-а-ная Маланьина кацавейка. Вата клоками болтаетца.

— Да вот,— говорит батюшко,— возьми кацавейку- то. Плоха, плоха — а все годитца хоть ноги прикрыть…

Только этта, жаланныи вы мои, батюшко-то проговорил, а баба-то, што ошпарена, скок с лавки-то. Середь избы встала, руки в боки.

— Да эфто што же такое,— говорит,— мое-то добро… да не помираю ешшо. Сама поношу, да из теплыих-то рученок кому хочу, тому и отдам.

Ошалели все… А мужик-то этак тихонько ноги-то с печи спустил, склонился, да и говорит:

— Ну вот, баба, ты перво слово молвила, теби-ка и горшок мыть.

Так батюшко-то плюнул, да и вон пошел…

Так вот, матушки вы мои, какой народ на билом свиту бывает…

Саша Турков ВКонтакте, İstanbul, Турция, id318308233

my astrology
Самый посещаемый проект связанный с астрологией и гороскопами в ВКонтакте. Входим в ТОП-15 по посещаемости среди всех сообществ.

Länd
Länd — это дизайн-студия световых аксессуаров и настольных часов.
Это идеальное сочетание форм, цвета и удовольствия. Присоединяйтесь.

|MK|
We are inspired by our horses.

Dr. Yaoi
Перед вступлением в паблик ознакомьтесь с правилами.
https://vk.com/topic-42386579_30574894

Частная группа

гег герк
Привет! Меня зовут Полина, я тут рисую ◉◡◉

💎 ПРАВИЛА, ОБЯЗАТЕЛЬНЫ К ПРОЧТЕНИЮ:
https://vk.com/topic-53350350_36084156

💎 МОИ АУШКИ (СМЕШАРИКИ, ШАМАН КИНГ И ДР.):
https://vk.com/topic-53350350_39746158

💎 Нюша — пухляшка! https://vk.com/wall-53350350_5401

💎 Рисую по фендомам:
Смешарики, Шаман Кинг, Аватар (Аанг, Корра), Лига Легенд, Салли Фейс, Наруто, Вселенная Стивена, Стар против сил зла, Ши-Ра, Ледибаг, Похождения Императора/Новая школа Императора + ОСы.

💎 Ссылка на статью «Можно было и промолчать»
https://vk.com/@lendi29-mozhno-bylo-i-promolchat

★ава — Lee Moon Young (Girls of the Wild’s)★

⛔ ГРУППА НОСИТ РАЗВЛЕКАТЕЛЬНЫЙ ХАРАКТЕР
БЕЗ УКАЗАНИЯ АВТОРСТВА НЕ ПУБЛИКОВАТЬ МОИ РАБОТЫ⛔

Sexy UK | Sexy people of the United Kingdom

Strangeland.
Привет, я Эмильена, 2D художник-фрилансер и ютубер из Казахстана. В этом месте я выкладываю свои рисунощки.
Заказы не беру, извините.
Artstation: https://www.artstation.com/emilyena
Youtube: https://www.youtube.com/c/Emilyena
Instagram: https://instagram.com/strangemilyena/
Twitter: https://twitter.com/EmilyenaStrange
Принты: https://www.inprnt.com/gallery/emilyena

Баба Яся (GrandMamka)
Привет, меня зовут Ясмина!
(´・ω・)ノ゛
ЗАКАЗЫ — ОТКРЫТЫ
ТРЕЙДЫ — ТОЛЬКО ЕСЛИ САМА ПРЕДЛОЖУ
РЕКВЕСТЫ — ЗАКРЫТЫ
У меня не всегда хватает сил на то, чтобы отвечать каждому комментатору, но я честно лайкаю вас! Спасибо за милые комменты! (А если я вас не лайкнула, то, скорее всего, это сильная степень моего неодобрения >:О P.s. ну или я не увидела, но это менее вероятно)
Правила читать здесь — https://vk.com/topic-56875953_40646243
Инста: grandmamka_art
Лайф-инста: liozozo
Твиттер: @GMamka

SNP: Celebrity || Знаменитости
=====МЕНЮ ГРУППЫ=====

• Правила группы!!!
Дорогие участники, пожалуйста, потратьте немного времени и ознакомьтесь с правилами, дабы избежать недоразумений:
vk.com/topic-57515120_28754329

• Конкурсы!!!
Темы и условия конкурсов вы найдете здесь:
vk.com/topic-57515120_28714746

• Игры от SNP: vk.com/album-57515120_197901989

Альбом для участвующих в конкурсах фотографий:
vk.com/album-57515120_180564326

• Предложения от участников группы. Сделаем SNP лучше с вашей помощью:
vk.com/topic-57515120_28667820

• Самые свежие фотосессии знаменитостей в нашей группе:
2013 год — vk.com/album-57515120_180070066
2014 год — vk.com/album-57515120_182883095
2015 — vk.com/album-57515120_208978342

• Уличный стиль звезд:
2013 — vk.com/album-57515120_180042330
2014 — vk.com/album-57515120_196847414
2015 — vk.com/album-57515120_208978429

• Мероприятия:
2013 — vk.com/album-57515120_180042283
2014 — vk.com/album-57515120_195253058
2015 — vk.com/album-57515120_208978400

• Мужской стиль: vk.com/album-57515120_180259229

• Постеры фильмов: vk.com/album-57515120_181025600

• Юмор: http://vk.com/album-57515120_180045336

• Архив звездных именинников:
vk.com/album-57515120_180069423

• Редкие фото: vk.com/album-57515120_180482951

• Цитаты: vk.com/album-57515120_192277928

• «Доброе утро»: vk.com/album-57515120_182208832

• Fap_Fap: vk.com/album-57515120_182209749

• Календарь от SNP:
2014 — vk.com/album-57515120_184332037
2015 — vk.com/album-57515120_208258422

• Наши работы в других группах: vk.com/album-57515120_180141513

• Наши фоторубрики: vk.com/album-57515120_191913410?act=edit

Old Gods of Asgard
Наши Тэги:
» | #OGoA_Music
» | #OGoA_Quotes
» | #OGoA_Followers
» | #OGoA_Interesting
» | #OGoA_Voting

мы пойдём ко дну с этим кораблём
мы не должны дать фанючеству на стэна умереть

щенок-кун
(koinu-kun)

ниче
здесь публикуется:
1. всё, что не попадает в [club53845179|че].
2. почти всё, что удаляется из [club53845179|че].

отсюда публикуются:
1. посты, которые заходят по лайкам. они отправляются в [club53845179|че].
2. посты, которые мне разонравились.
3. долбоёбы в комментах.

Пантук
По рабочим вопросам: [email protected]

Патреон: https://www.patreon.com/pontyk

Hetacomics 16+
Переводы.

Vento del sud
Группа посвящена культуре, архитектуре и эстетике Южной Европы, а также людям южно-европеоидных типов.

Даже ведьмы умеют плакать (Литвинова Анна,Литвинов Сергей)

00:00 / 04:11

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (01)

43:21

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (02)

11:46

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (03)

31:50

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (04)

27:22

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (05)

23:53

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (06)

35:23

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (07)

06:11

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (08)

21:27

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (09)

31:35

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (10)

20:40

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (11)

38:28

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (12)

22:27

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (13)

36:45

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (14)

30:01

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (15)

29:14

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (16)

00:55

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (17)

58:16

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (18)

06:26

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (19)

40:41

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (20)

20:30

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (21)

26:42

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (22)

12:07

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (23)

35:08

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (24)

12:12

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (25)

35:06

Dazhe_vedmy_umeyut_plakat_ (26)

Группа ПКД-110/17 | Образовательная социальная сеть

_{Добро пожаловать в мир группы ПКД-110/17! Окунитесь в атмосферу творчества, любви к науке, дружелюбия и взаимопонимания Наша группа — это микс самых дружелюбных,умных,отзывчивых и весёлых ребят. У нас 28 креативных и энергичных студентов: 18 девушек и 10 юношей.Студенты группы всегда учавствуют в разных конкурсах, например,»День первокурсника», «Студенческая весна», «КВН» и тд. Каждый человек в нашей группе обладает своими особенными качествами: кто-то занимается благотворительностью, кто-то участвует в научных конференциях. В нашей группе кадый поддерживает друг друга и ценит друг друга. Скажем кратко, мы — неделимы, являемся единым целом.}

АКТИВ ГРУППЫ  ПКД-110/17

Староста группы — Ахмадалиева Людмила

Зам. страросты группы — Павлова Анна

Физорг — Бенцлер Данил, Гомонов Артур

Культурно-массовый сектор — Козлова Ольга, Пучкова Алена

Реддколлегия — Глоба Николь, Глоба Эстер

Убеный сектор — Бужужан  Екатерина

Литература — Доронина Галина Николаевна

История — Парфенов руслан Юрьевич

Математика — Крупина Наталья Александровна

Информатика — Черясова Екатерина Владимировна, Зазерина Татьяна Алексеевна

Право- Самсонова Ирина Викторовна

Иностранный язык — Лубова Елена Станиславовна, Жиделева Оксана Викторовна

Естествознание — Филатова Евгения Михайловна

Физическая культура — Рыбников Валерий Викторович

Обучающиеся группы ПКД-110/17 активно учавствуют в следующих мероприятиях:

1. Недели безопасности с 26 по 30 сентября 2017г.;
2. Акции памяти «Одеяло мира» 05 сентября 2017г.;
3. В конкурсе приготовления тыквенного пирога 05.10.2017г;
4.  В конкурсе игры КВН – диплом 1 степени;
5. В конкурсе презентаций, посвященной Дню матери – диплом 3 степени;
6. В международном дистанционном конкурсе «Старт» по предмету информатика;
7. Диплом 1 степени в конкурсе — выставки поделок из природного материала «Осенние фантазии» — Акчурина Лейсен;
8. Диплом 2 степени в областном конкурсе «Выбирая образование – выбираю будущее» в номинации «знаменитые люди профессии» — Павлова Анна.
9. Диплом 1 степени в игре-викторине «Лучший знаток по охране труда»

Поддерживать регулярную связь с куратором группы, контролировать посещаемость и успеваемость своих детей.

Фамилия Крупина

Имена для Крупина

• Лилия Крупина 4
• Ирина Крупина 4
• Ира Крупина 4
• Галина Крупина 4
• Алина Крупина 4
• Ольга Крупина 3
• Крупина
• Наталья
• Крупина
• Наталья Крупина 3 2
• Юля Крупина 2
• Юлия Крупина 2
• Юлиана Крупина 2
• Юлия Крупина 2
• Елена Крупина 2
• Яна Крупина 2
• Виктория Крупина 2

000 5000 Крупина

• 000 Крупина
• 2
• Валентина Крупина 2
• Татьяна Крупина 2
• Татьяна Крупина 2
• Таня Крупина 2
• Светлана Крупина 2
• Света Крупина 2
• София Крупина 2

9000 5000 Крупина 2

• София Крупина 2
• 2
• Олеся Крупина 2
• Оксана Крупина 2
• Нина Крупина 2

90 005 Наташа Крупина 2

• Наталья Крупина 2
• Наталья Крупина 2
• Наталья Крупина 2
• Настя Крупина 2
• Надя Крупина 2
• Надежда Крупина 2
• Марья Крупина 2
• Маша Крупина 2
• Марина Крупина 2
• Мария Крупина 2
• Людмила Крупина 2
• Любовь Крупина 2
• Любовь Крупина 2
• Лиза Крупина 2
• Лера Крупина 2

Крупина

Лена

Крупина 2

Лена

Крупина 2

• Кристина Крупина 2
• Катя Крупина 2
• Катерина Крупина 2
• Карина Крупина 2
• Юлиана Крупина 2
• Юлия Крупина 2
• Ирис Крупина 2
• 000 Krupina 2
• Иришка Крупина 2
• Иришка Крупина 2
• Елена Крупина 2
• Ганна Крупина 2
• Евгения Крупина 2
• Евгения Крупина ina 2
• Элина Крупина 2
• Елена Крупина 2
• Екатерина Крупина 2
• Диана Крупина 2
• Даша Крупина 2
• Дарья Крупина 2
• Арина Крупина 2
• Арина Крупина 2
• Крупина 2
• Ана Крупина 2
• Алёна Крупина 2
• Алла Крупина 2
• Алинка Крупина 2
• Александра Крупина 2
• Алевтина Крупина 2
• Аленочка
• 0005 Alenochka Krupina 2

Крупина

• Женя Крупина
• Екатерина Крупина
• Янна Крупина
• Всеслава Крупина
• Виталик Крупина
• Виктория Крупина
• Викка Крупина
• 000 Крупина
• 000 Крупина
• Валя Крупи на
• В. Крупина
• Валерия Крупин
• Valeriia Крупин
• Tuningclub Крупин
• Танюшка Крупина
• Таннь Крупин
• Таня Крупина
• Swetlana Крупин
• Swetik Крупин
• Снежана Крупина
• Сашка Крупин
• Роза Крупин
• Ростик Крупина
• Робус Крупина
• Рита Крупина
• Раиса Крупина
• Proficredit Krupina
• Павел Крупина
• Полина Крупина
• Olka Krupina
• Nicolewia 9000 Krupina
• Oliwas Крупина
• Настена Крупина
• Нарюшка Крупина
• Надуснка Крупина
• Надин Крупина
• Наденька Крупина
• Мила Крупина
• Место Крупина
• Mb ина
• Майя Крупина
• Машка Крупина
• Мария Крупина
• Маришка Крупина
• Мария Крупина
• Маргарита Крупина
• Ляля Крупина
• Ляля Крупина
• Люба 9000 Крупина 9000 Ляля Крупина
• Люба
• 000 Крупина 9000 Ляля Крупина
• Люба 9000 Крупина 9000 Ляля 9000 9000 Крупина 9000 Луба 9000 9000 Крупина 9000
• Лиза Крупина
• Лина Крупина
• Лерочка Крупина
• Лайла Крупина
• Ласло Крупина
• Лара Крупина
• Лана Крупина
• Кристена Крупина

000 Крупина

• 000 Крупина
• 000 Крупина
• 000 Крупина
• 000 Крупина
• 000 Крупина
• 000 Крупина
• 000 Крупина
• 000 Крупина
• 000 Крупина
• 000 Крупина
• 000 Крупина
• 000 Крупина
• Елена Крупина
• Иилия Крупина
• Гилия Крупина
• Фунрун Крупина
• Фонтана Крупина
• Ева Крупина
• Эльмира Крупина

0005 Элмира Крупина

• 0005 Элмира Крупина Крупина
• Дина Крупина
• Давид Крупина
• Дария Крупина
• Дарья Крупина
• Дагмара Крупина
• Ася Крупина
• Асилиса Крупина
• Анья Крупина
• 0005 Аня Крупина
• Анастасия Крупина
• Алия Крупина
• Александр Крупина
• Аленушка Крупина

Опечатки и опечатки

krupnia, kurpina, krpuina, krupin, krupinaa, krupina, krupina, krupina, krupina, krupina, krupina, krupina, krupina, krupina, krupina, krupina, krupina, krupina for Krupina

Подобные названия

Krupinac
Trupina / Hrupina

Предварительно собранные ядерные поры вставляются в ядерную оболочку на ранней стадии разработки

Резюме

Комплексы ядерных пор (NPC) охватывают ядерную оболочку (NE) и опосредуют ядерно-цитоплазматический транспорт.В ооцитах многоклеточных и ранних эмбрионах NPCs располагаются не только внутри NE, но также и на некоторых мембранных листах эндоплазматического ретикулума (ER), называемых кольцевидными ламеллами (AL). Хотя роль AL как пулов хранения NPC обсуждалась, остается спорным вопрос о том, вносят ли они вклад в плотность NPC в NE и как они это делают. Здесь мы показываем, что AL вставляется в NE, поскольку ER обеспечивает быструю ядерную экспансию у эмбрионов бластодермы Drosophila . Мы демонстрируем, что NPC внутри AL напоминают поровые каркасы, которые созревают только после вставки в NE.Мы очерчиваем топологическую модель, в которой отверстия NE имеют решающее значение для поглощения AL, которое, тем не менее, происходит без нарушения барьера проницаемости NE. Наконец, мы показываем, что этот непредвиденный способ вставки пор регулируется в процессе развития и действует до гаструляции.

Введение

У эукариот двойная мембранная ядерная оболочка (NE) окружает нуклеоплазму и отделяет ее от цитоплазмы. Внутренняя ядерная мембрана (INM) обеспечивает контакт с хроматином, а внешняя ядерная мембрана (ONM) является продолжением эндоплазматического ретикулума (ER).Два бислоя сливаются в комплексах ядерных пор (NPC), которые образуют водные каналы, через которые происходит регулируемый транспорт макромолекул. NPC состоят из множества копий ~ 30 различных нуклеопоринов (Nups), которые организованы в биохимически различные субкомплексы (A, S1A ‘и S1B). Два таких модуля, комплекс внутреннего кольца (также называемый комплексом Nup93) и Y-комплекс (также называемый комплексом Nup107) составляют каркас NPC, который симметричен в плоскости NE. FG-Nups (содержащие богатые фенилаланином-глицином внутренне неупорядоченные белковые домены) прикрепляются к каркасу.Они составляют барьер проницаемости и взаимодействуют с перемещающимися грузовыми комплексами. Некоторые из них (например, Nup214 / 88, Nup358 [RanBP2] и Nup153) вносят асимметрию за счет специфического связывания с цитоплазматической или ядерной стороной NPC, соответственно (обзор в Grossman et al., 2012) (B).

Композиция NPC, относящаяся к

(A) Крио-ЭМ-структура человеческого NPC (von Appen et al., 2015) вместе с ядерными мембранами (серый цвет).

(A ‘) Схематическое изображение субкомплексов NPC.Трансмембранные ядра, внутреннее кольцо и Y-комплекс симметричны, тогда как отдельные субкомплексы создают асимметрию по всей ядерной оболочке.

(B) Составляющие Drosophila NPC. Nups, которые использовались в экспериментах по визуализации в этом исследовании, выделены белым (Y-комплекс Nups), красным (FG-Nups) и синим (Mtor).

(C) Ядерная оболочка (NE), эндоплазматический ретикулум (ER) и кольцевые пластинки (AL) составляют один континуум мембраны и имеют общий просвет.

Очевидно, огромный размер и сложность композиции NPC делают его сборку и вставку мембраны очень сложной задачей.Были описаны два различных пути сборки NPC, которые временно разделены во время клеточного цикла. Во-первых, во время интерфазы NPC собираются de novo на закрытом NE (D’Angelo et al., 2006). Сборка интерфазы происходит повсеместно у эукариот и строго требует слияния INM и ONM с помощью механизма, который понимается лишь частично (Doucet and Hetzer, 2010). Во-вторых, слияние мембран не требуется для сборки NPC на выходе из митоза. Этот так называемый постмитотический режим сборки ограничен эукариотами, которые разбирают свои NPC во время митоза на растворимые субкомплексы после фосфорилирования митотическими киназами (Laurell et al., 2011). В анафазе дефосфорилирование Nups, как полагают, запускает упорядоченную повторную сборку на разделенных хроматидах до или в то время, когда мембраны окружают дочерние ядра (Doucet et al., 2010, Dultz and Ellenberg, 2010, Dultz et al., 2008). Оба механизма вставки основаны на поэтапном привлечении предварительно собранных субкомплексов. Вставка предварительно собранных NPC в NE (насколько нам известно) еще не описана.

NPC не только находятся внутри NE, но также обнаруживаются в многослойных цитоплазматических мембранах, называемых кольцевидными пластинками (AL), которые являются субдоменом ER (C) (Cordes et al., 1996, Daigle et al., 2001). На основе двумерных (2D) просвечивающих электронных микрофотографий эти мембранные стопки воспринимаются как параллельные мембранные листы, украшенные NPC (далее называемые AL-NPC), которые морфологически выглядят похожими на их аналоги на ядерной оболочке (NE-NPC) (Kessel, 1983 г.). AL появляется в некоторых, но не во всех трансформированных клеточных линиях (Cordes et al., 1996, Daigle et al., 2001) и очень распространен в зародышевых клетках и ранних эмбрионах во всех типах животных, включая Xenopus , Caenorhabditis elegans , море urchin, Drosophila , а также человек (Soupart, Strong, 1974).Предполагается роль AL в качестве хранилища для материнских отложенных Nups, которые могут быть доступны для мейоза и быстрых клеточных циклов во время раннего эмбриогенеза (Lénárt and Ellenberg, 2003, Longo and Anderson, 1968, Spindler and Hemleben, 1982), но экспериментально не доказано. Несмотря на эти фундаментальные и давние претензии, функция AL остается неуловимой и противоречивой, в первую очередь по двум причинам: (1) было трудно представить, как вставка параллельно уложенных друг на друга мембранных листов, содержащих предварительно собранные и, возможно, предварительно ориентированные NPC. топологически возможно; и (2) прямые экспериментальные доказательства вклада AL-NPC в пул NE-NPC никогда не были получены.Напротив, предыдущее исследование на эмбрионах Drosophila обнаружило большие растворимые пулы Nups транспортного канала и пришло к выводу, что вставка NPC, вероятно, происходит из растворимых цитозольных Nups (Onischenko et al., 2004).

Здесь мы обращаемся к функции AL в физиологическом контексте эмбриона бластодермы Drosophila , который богат AL, в то время как он претерпевает серию из 13 синхронизированных митозов в синцитии (A). Впоследствии плазматические мембраны окружают кортикально выровненные соматические ядра в расширенной интерфазе 14 ^th , формируя первый слой эпителиальных клеток перед тем, как эмбрион инициирует гаструляцию (Schejter and Wieschaus, 1993).Это происходит одновременно с широким началом транскрипционной активности зиготического генома, основным переходом в развитии, присутствующим у всех многоклеточных животных (Newport and Kirschner, 1982). В синцитиальной бластодерме развитие клеточного цикла происходит очень быстро, с интерфазой длительностью ~ 10 мин в течение ранних клеточных циклов. По крайней мере, в клетках млекопитающих, de novo интерфазная сборка NPC, как было описано, протекает с заметно более медленной кинетикой (Dultz and Ellenberg, 2010). Это привело нас к предположению, что сборка NPC в закрытый NE у эмбрионов Drosophila может происходить с помощью другого, более быстрого механизма.Отслеживая NPC в живых эмбрионах, мы демонстрируем прямое поглощение AL-NPCs в NE, поскольку ER подпитывает ядерную экспансию. Мы выводим топологическую модель, которая объясняет, как INM становится непрерывным при вставке мембранных листов из ER. Мы пришли к выводу, что вставка AL в NE является ранее непредвиденным способом вставки NPC, который полагается на предварительно собранные, но еще незрелые каркасы NPC и действует до гаструляции.

AL-NPC, вставленные в ядерную оболочку, относящиеся к

(A) Схематическое изображение раннего эмбриогенеза Drosophila .Соматические ядра проходят 13 митотических циклов в общей цитоплазме до образования первого слоя эпителиальных клеток (клеточность) в длительной 14-й интерфазе. Большинство представленных экспериментов проводится на стадии синцитиальной бластодермы, где ядра могут быть легко визуализированы с помощью конфокальной микроскопии из-за их близости к объективу микроскопа, прилегающей к поверхности эмбриона.

(B) Корреляционная световая и электронная микроскопия (CLEM) эмбриона указанного генотипа (см. Также B – 1B ″).Флуоресценция RFP :: Nup107 сосредоточена вдоль NE и на AL-NPC (стрелка на B). Изображения световой микроскопии и электронные микрофотографии одного и того же среза коррелируют с His2A :: GFP в ядре и автофлуоресценцией митохондрий в GFP-канале (B ‘).

(C – E) AL-NPC локализуются и вставляются вдоль мембран ER. (C и D) кадры вида сверху из замедленной видеозаписи эмбрионов бластодермы, экспрессирующих резидентный слитый белок ER GFP :: KDEL (C ″ и D ″), инъецированный WGA-Alexa555, маркирующим FG Nups (C ‘и D’) в телофаза (C – C ″) или межфазная (D – D ″).AL-NPC реформируется на мембранах в области веретена в телофазе (стрелки на C ‘) и совместно локализуются на мембранах ER во время интерфазы (стрелки на D’). См. Также фильм S1.

(E) AL-NPC вставляются в NE вдоль мембран ER. Фотография сверху и кимограмма, покрывающая область интереса (ROI) в рамке (E – E ″) из видеоролика, на котором эмбрион, экспрессирующий KDEL :: GFP, инъецирован флуоресцентно меченным WGA. Меченные WGA AL-NPCs вставляются вдоль мембраны ER в NE (стрелки). См. Также Movie S3.

Результаты

Ядерные поры Вставка из ER в NE

Чтобы исследовать, вносят ли AL-NPCs вклад в пул NE-NPC, мы провели эксперименты по визуализации в реальном времени на эмбрионах бластодермы Drosophila до образования первой соматической клетки. слой (А).На этой стадии развития AL в изобилии и, таким образом, потенциально могут служить резервуаром для NE-NPC. Чтобы отслеживать NPC на протяжении всего раннего эмбриогенеза, мы экспрессировали функциональные слияния GFP или RFP Nup107 (Katsani et al., 2008) для изображения каркасных Nups и вводили докритические концентрации флуоресцентно меченного лектина агглютинина зародышей пшеницы (WGA) для маркировки FG-Nups. . В интерфазе GFP :: Nup107 локализуется в NE и в выступающих фокусах по всей цитоплазме (A), подобно структурам, которые ранее были охарактеризованы как AL (Cordes et al., 1996, Дайгл и др., 2001, Онищенко и др., 2004, Онищенко и др., 2005). Как и ожидалось, эти фокусы также были окрашены положительно на Nups транспортных каналов (D – 1D ″) и всегда локализованы на мембранах (C – S2E ″). Чтобы еще раз подтвердить, что эти фокусы морфологически идентичны AL, мы провели корреляционную световую и электронную микроскопию. Флуоресценция RFP :: Nup107 была сильно обогащена вдоль NE и на AL (B – 1B ″, B и S2B ′). Мы пришли к выводу, что флуоресцентная визуализация живых эмбрионов хорошо подходит для изучения пространственно-временной динамики кольцевидных пластинок.

AL-NPC вставляются в ядерную оболочку

(A и A ‘) Ядерный рост и распределение NPC во время интерфазы в синцитиуме Drosophila : кадры из замедленного видео, записанного с GFP :: Nup107, экспрессирующего эмбрион, изображенный справа после начала интерфазы (A) и через 5 минут (A ‘). GFP :: Nup107 локализуется в NE и в цитоплазматических фокусах (стрелки) в (A), которые исчезают при t + 5 мин (A ‘).

(B – B ″) Цитоплазматические фокусы флуоресценции Nup107 локализуются на AL-NPC.Корреляционная световая и электронная микроскопия (CLEM) RFP :: Nup107, экспрессирующего интерфазный эмбрион. RFP :: Nup107 сконцентрирован вдоль NE и в фокусах (заключены в рамку в B), которые соответствуют NPC вдоль мембран ER (стрелки в B ‘и B ″).

(C) Плотность NPC остается постоянной по мере роста ядер. Количественная оценка нормированного увеличения ядерной поверхности (синие кривые) и средней интенсивности флуоресценции GFP :: Nup107 ± стандартное отклонение на NE (красные кривые) во время интерфаз. Значения на обоих графиках нормализованы к самому раннему измеренному моменту времени для каждого фильма (n = 71 ядро ​​в четырех эмбрионах).

(D – E) Y-комплексный белок Nup107 и WGA-меченные транспортные Nups совместно локализуются в NE и в AL-NPC, которые вставляются в NE. Кадр сверху (D – D ″) и кимограф (E) из покадровой видеозаписи, на которой изображен синцитиальный эмбрион бластодермы, инъецированный WGA-Alexa555, экспрессирующий GFP :: Nup107 (см. Также фильм S2). Вставка фиксируется в кимографе (E), который охватывает интересующую область (ROI), отмеченную рамкой (D).

(F – G) Кадры (F – F ″) и кимограмма (G) окрашенной в синий цвет области интереса из покадровой видеозаписи с фото преобразованным EosFP :: Seh-1 до (0 с, F) или после ( 6 с, F ‘и 145 с, F ″) фото-преобразование AL-NPC, смежных с NE.Перенос NPC от AL к NE документируется латеральной дисперсией преобразованного сигнала, которая начинается через ~ 100 с (G).

(H) Количество AL-NPC падает на ранних интерфазах. Количественная оценка относительного числа AL-NPC, выведенного из флуоресценции GFP :: Nup107 для четырех эмбрионов, визуализированных вживую по интерфазам. AL-NPC подсчитывали из z-срезов на расстоянии 1 мкм, охватывающих высоту ядра, в постоянном поле зрения, содержащем ~ 10 ядер для каждого эмбриона.

(I) Интенсивность флуоресценции GFP :: Nup107 смещается от AL к NE в первые 25% интерфаз, когда число AL падает больше всего (H).Интенсивности флуоресценции были интегрированы на последовательных конфокальных срезах, покрывающих всю высоту ядра в NE (NE-NPCs) и AL (AL-NPCs). Цитоплазматический GFP :: Nup107 определяли по средней интенсивности флуоресценции. Анализ был проведен на двух эмбрионах (n = 13 и 11 ядер соответственно). См. Типичное изображение A; планки погрешностей представляют собой ± стандартное отклонение для нескольких областей интереса. Все изображения получены от эмбрионов в 10–13 циклах стадии синцитиальной бластодермы.

См. Также и фильмы S2 и S4.

Количественная оценка изображения показала увеличение ядерной поверхности в 2,5–3 раза во время интерфаз, что указывает на значительное поглощение мембран ER в течение нескольких минут (A, 1A ‘и 1C). Таким образом, площадь поверхности ядра непосредственно перед делением более чем в два раза больше, чем объединенные поверхности двух дочерних ядер после деления. Это открытие указывает на избыток нуклеопоринов по отношению к доступной ядерной поверхности после митоза. И NE-NPC, и AL-NPC разбираются во время митоза (Cordes et al., 1996, Онищенко и др., 2005, Стафстром, Стэхелин, 1984b). Это оставляет фенестрированный NE, который, в отличие от позвоночных, остается на протяжении митоза вокруг разделяющих сестринских хроматид и митотического веретена, за исключением центросом (Movie S1). Одновременно с повторной сборкой NE-NPC в дочерних ядрах в позднем митозе, AL-NPCs появляются сначала на мембранах веретена (C – S2C ″; Movie S1), что согласуется с идеей избытка нуклеопоринов в позднем митозе / ранней интерфазе.

Чтобы выяснить, вносят ли AL-NPCs вклад в пул NE-NPC во время следующей интерфазы, мы сначала определили, уменьшается ли плотность NE-NPC во время расширения ядерной поверхности.Мы количественно оценили среднюю интенсивность флуоресценции GFP :: Nup107 в NE и обнаружили, что она остается почти постоянной (C). Как следствие, NPC должны постоянно вставлять в NE по мере увеличения его поверхности. Напротив, AL-NPC были в большом количестве в ранней, но не в поздней интерфазе (A и 1A ‘). Поэтому мы исследовали их судьбу во время интерфазной прогрессии, отслеживая AL-NPC в живых эмбрионах, и обнаружили, что они вставляются в NE (D – 1G и E – S2E ″; фильмы S2 и S3) вдоль мембран ER (E – S2E ″; Movie S3).Чтобы напрямую подтвердить перенос Nups из наблюдаемых цитоплазматических очагов в NE, мы визуализировали эмбрионы, экспрессирующие фотоконвертируемый Seh2-EosFP. После фотопреобразования флуоресцентного пятна вблизи ядра сигнал оставался локально ограниченным в течение ~ 100 с, прежде чем он латерально разрешился в проксимальный NE примерно за тот же период времени (F – 1F ″ и 1G; Movie S4), что свидетельствует о критическое событие перед боковой диффузией. Мы пришли к выводу, что AL-NPCs вставляются в NE во время межфазных границ бластодермы.

Предыдущая морфометрия на основе EM показала, что общее количество AL-NPCs остается постоянным в синцитиальной бластодерме, т.е. в течение первых 90 минут эмбриогенеза Drosophila (Onischenko et al., 2004). Однако, если AL-NPC вносят значительный вклад в пул NE-NPC, вставляя в NE во время его расширения, их количество должно уменьшаться, по крайней мере, временно в гораздо более коротких временных масштабах, а именно в течение ~ 10 минут каждой интерфазы. В самом деле, мы обнаружили, что AL-NPCs уменьшаются по мере продвижения интерфазы (H).Это снижение было особенно сильным в первой половине интерфазы, когда скорость роста ядер и, следовательно, встраивания NPC была максимальной (C). Чтобы оценить, отражает ли уменьшение количества AL-NPC перераспределение NPC от AL к NE, мы измерили соответствующие уровни флуоресценции GFP :: Nup107 в обоих компартментах в трех измерениях с течением времени. Для всех количественно оцененных ядер интегральные интенсивности флуоресценции NE GFP :: Nup107 увеличивались между 70% и 100% в течение первой четверти интерфазы, в то время как обратно пропорционально интенсивности на AL сильно уменьшались, отражая исчезновение AL (I).Это поддерживает сценарий, в котором пул NE-NPC преимущественно питается за счет интеграции AL-NPC. Альтернативно, AL может разбираться, а растворимые Nups могут способствовать образованию пор на растущем NE из цитоплазмы. Однако это маловероятно, поскольку фоновая интенсивность GFP :: Nup107 в цитоплазме оставалась постоянной при разборке AL (I). Мы пришли к выводу, что наши данные скорее поддерживают сценарий, в котором предварительно собранные NPC вставляются из AL в NE.

Есть, однако, серьезные препятствия, которые ставят под сомнение представление о том, что интактные NPC могут вставляться в NE: во-первых, NPC имеют присущую композиционную направленность в плоскости NE (B).Если бы AL-NPC были идентичны NE-NPC, они были бы собраны асимметрично в отсутствие ядерного отсека, обеспечивающего сигнал направленности. Их также нужно было вставить в сетевой элемент в правильной ориентации. Во-вторых, интеграция ER-листов, содержащих NPC, в неповрежденный NE создает серьезные топологические препятствия. В частности, далеко не очевидно, как лист мембраны AL может стать непрерывным с INM герметичного неповрежденного NE. Как, таким образом, возможна установка AL-NPC?

AL-NPC похожи на поровые каркасы

Асимметрия NPC происходит из наборов FG-Nups, которые обнаруживаются исключительно на нуклеоплазматической или цитоплазматической стороне NPC, в отличие от симметрично встроенных ядер каркаса внутреннего кольца и Y -комплексы (A и S1B).Поэтому мы исследовали, сохранилась ли композиция NPC в AL. Мы подвергли эмбрионы бластодермы субклеточному фракционированию и сравнительно проанализировали фракции, обогащенные ядрами, микросомальными мембранами, содержащими AL (без NE) и растворимые цитозольные белки, с помощью количественной масс-спектрометрии (A – S3D ″, A и S4B). Мы обнаружили, что AL-NPCs содержат полный набор компонентов каркаса NPC, а именно все члены внутреннего кольца и Y-комплексов (A и B). Напротив, их уровни были низкими или не определялись в цитозоле, за исключением Sec13, известного члена цитозольного комплекса коатомеров (Fath et al., 2007) (А и Б). Эти данные дополнительно подтверждают предложенный выше сценарий, в котором растворимые пулы каркасных Nups не могут вносить значительный вклад в поддержание количества NE-NPC во время интерфазы (см. Также I).

AL-NPC похожи на поровые каркасы

(A) Состав NE-NPC и AL-NPC. Абсолютная количественная оценка (iBAQ) на основе средней интенсивности Nups, обнаруженных в ядрах, содержащих NE-NPC, микросомальных мембранах, содержащих AL-NPC, и цитозоле после фракционирования эмбрионов Drosophila на стадии синцитиальной бластодермы (n = 3 биологических повторения).Nups сгруппированы в известные подкомплексы и имеют цветовую кодировку, как показано на (E ‘).

(B) Вестерн-блоттинг фракционированных эмбрионов синцитиальной бластодермы дрозофилы . Ламин Dm0 является исключительно ядерным (N), тогда как α-тубулин сильно обогащен цитоплазмой (C), что подтверждает качество фракционирования. Обнаружение с помощью mAb414, распознающего панель FG-Nups, выявляет Nup358 преимущественно в мембранах (M) и ядрах, но отсутствует в цитозоле. Другие ядра FG в основном растворимы (см. Текст).Амидо черный показывает одинаковую загрузку.

(C – D ″) Вид сверху на фиксированный Drosophila синцитиальный эмбрион бластодермы в интерфазе. Компоненты ядерной корзины Nup153 (C и C ‘) и Mtor (D и D’) отсутствуют в AL-NPC (стрелки в C ″, D ″), которые окрашиваются положительно на mAb414 (C и C ″) или WGA (D и D ″), оба маркируют FG-Nups (включая Nup358).

(E и E ‘) AL-NPC (E) представляют собой поровые каркасы, состоящие из трансмембранных Nups, внутреннего кольца и нуклеопоринов Y-комплекса, расширенных с помощью Nup358, которые могут или не могут быть прикреплены симметрично через мембраны ER.NE-NPCs (E ‘) рекрутируют растворимые Nups для конструирования зрелой поры, которая асимметрична по NE.

См. Также и.

Субклеточное фракционирование эмбрионов, относящееся к

(A) Биохимическое фракционирование синцитиальной бластодермы эмбрионов Drosophila .

(B – D) Контроль качества фракционирования. (B – B ″) Показатели абсолютного количественного определения (iBAQ) на основе средней интенсивности выбранных контрольных белков, репрезентативных для ядер, мембран или цитоплазмы, измеренные в трех соответствующих фракциях (n = 3 биологических повтора).(C и D) Иммунофлуоресценция ядерных и мембранных фракций, окрашенных на ДНК и мембранным красителем DiIO16 соответственно. Ядерная целостность сохраняется в ядерной фракции (C и C ‘), где ДНК заключена в NE, меченный DiIO16. К ядрам не прикреплены никакие другие мембраны (C ″). Во фракции мембран (D и D ‘) ядер нет.

(E и F) Ядерный импорт nls-GFP задерживается по сравнению с накоплением каркаса NPC в NE. Ранние межфазные кадры из интервальной видеозаписи RFP :: Nup107 (E) и nls-GFP (E ‘).(F) Средние интенсивности флуоресценции ядерных / цитоплазматических nls-GFP и RFP :: Nup107 в NE были количественно определены в областях интереса (ROI) на изображениях, как на (E и E ‘). Средние интенсивности ± STDV (n = 23 ядра в 2 эмбрионах) нанесены на график как функция% межфазной прогрессии.

AL-NPCs напоминают поровые каркасы, относящиеся к

Альтернативный анализ и представление данных масс-спектрометрии показаны на A и B – S3B ″. Кратные изменения обилия белков и соответствующие значения p для контрольных белков (A) или Nups (B) показаны с цветовой кодировкой (n = 3 биологических повтора).Оранжевый цвет относится к случаям, в которых белок последовательно обнаруживался в трех биологических повторностях одной фракции, но был ниже предела обнаружения во всех повторностях другой фракции (здесь кратность изменения была установлена ​​на 2). Nups показаны сгруппированными в известные подкомплексы; цветовой код в соответствии с A.

FG-Nups 358 и 98 демонстрировали субклеточное распределение, которое было аналогично каркасным Nups (A и B). Недавно было показано, что оба они вносят важный вклад в формирование каркаса NPC (Fischer et al., 2015, Stuwe et al., 2015, von Appen et al., 2015). Примечательно, что присутствие Nup98 в AL-NPCs, белке, который является важным компонентом барьера проницаемости NPC (Hülsmann et al., 2012), указывает на то, что NPCs непроницаемы для более крупных молекул в любое время. Напротив, члены комплексов Nup62 / 58/54 и Nup214 / 88 (последний называется Mbo у мух), а также компоненты ядерной корзины Tpr (называемые Mtor у мух) и Nup153 отсутствовали в AL-NPC (A– 2D и B). Вместо этого комплексы Nup214 / 88 и Nup62 / 58/54 были в большом количестве в цитозоле (A, 2B и B), что согласуется с предыдущими биохимическими результатами, которые идентифицировали определенные FG-Nups как преимущественно растворимые и исключенные из ER-мембран. (Онищенко и др., 2004). Таким образом, можно предположить, что сборка NPC завершается после вставки в NE за счет рекрутирования растворимых Nups из цитозоля, чтобы установить направленность и транспортную компетентность. В самом деле, накопление в ядре nls :: GFP было задержано по сравнению с фазой всплеска вставки AL-NPC (E и S3F). Мы пришли к выводу, что AL-NPCs представляют собой поровые каркасы, лишенные большинства FG-Nups и всех компонентов ядерной корзины. За исключением Nup358, Nups, которые асимметрично распределяются по NE-плоскости в NE-NPCs, отсутствуют в AL-NPCs (E и 2E ‘).

Топология вставки AL

Чтобы выяснить, как топологически возможна вставка AL-NPC, мы попытались определить предполагаемые этапы вставки AL с помощью ультраструктурного анализа. Сначала мы проанализировали срезы поэтапных зародышей бластодермы с помощью просвечивающей электронной микроскопии после замораживания под высоким давлением и замены замораживания. AL были обнаружены в цитоплазме по всему эмбриону как взаимосвязанные стопки мембран, содержащих NPCs (A, A и S6B – S6B ″). AL, которые были близко к NE и, таким образом, потенциально могли участвовать в событии вставки, часто казались непрерывными с NE (A, 3B, B ″ и S5C ′).Поразительно, что, как видно на множестве сечений, эти участки слияния AL-NE часто находились рядом с очевидными отверстиями в NE (A и 3B). На электронных микрофотографиях видно, что по краям этих отверстий INM и ONM сливаются, что подчеркивает, что промежутки не являются артефактами подготовки образца (A и 3B). Мы использовали корреляционную световую и электронную микроскопию, как описано выше, и записали электронную томограмму в месте, где флуоресцентное пятно RFP :: Nup107 рядом с NE указывало на потенциально продолжающееся событие вставки (C, 3C ‘и B – S5B ″).Хотя наблюдаемая топология мембраны в этой области была сложной, она ясно показывала критические особенности: участок AL, связанный с NE, в непосредственной близости от отверстий NE. В заключение, неожиданное открытие отверстий NE предлагает топологическое объяснение того, как INM становится непрерывным с AL (см. Ниже).

Топология вставки AL

(A – B) NE-отверстия сопровождают вставки AL. (A и A ‘) Просвечивающие электронные микрофотографии (TEM) двух последовательных серийных срезов ядра с близко расположенными AL-NPC (стрелки).Обратите внимание на четкое соединение INM-ONM обведенного отверстия (A), которое заменено неповрежденным NE на (A ‘), в то время как отверстие в рамке видно в обеих секциях. (B) Электронная микрофотография ядра, где NE открыт (в рамке) и продолжается с растяжением ER.

(C) Захват AL-вставки в NE с помощью корреляционной световой и электронной микроскопии (CLEM) и томографии (C ‘). (C) RFP :: Nup107 локализуется в NE и обогащается проксимальными AL-NPC (стрелка).

(C ‘) Отдельный срез томограммы, записанной в области, обозначенной желтым прямоугольником на (C).Стрелки указывают на мембранное соединение вставки AL с NE, рядом с отверстием NE.

(D) Множественные отверстия NE (стрелки) видны в объеме, содержащем ядро, которое было получено с помощью сканирующей электронной микроскопии сфокусированным ионным пучком (FIB-SEM; показан один срез, наложенный на NE, который визуализирован изоповерхностью в синий).

(E) Гистограмма диаметров отверстий NE, измеренных в ПЭМ, как показано на (A, A ‘и B). Большинство отверстий NE находятся в диапазоне 400–800 нм.

(F – G) FIB-SEM визуализирует непрерывность листов мембраны AL с NE. Срезы через объем FIB-SEM по касательной к ядру (F – F ″) и визуализация изоповерхности той же области (G). (F – F ″) Нарезки под немного разными углами. Обратите внимание, что поперечное сечение NE с NPC на виде сбоку (желтые стрелки на F – F ″) перпендикулярно листу мембраны AL, который имеет разветвленную топологию и содержит несколько NPC на виде сверху (белые стрелки на F – F ″).

См. Также и.

Топология AL-вставки, относящаяся к

(A) Просвечивающая электронная микрофотография (ТЕМ) эмбриона синцитиальной бластодермы Drosophila в интерфазе, показывающая NE и прилегающий AL (желтые прямоугольники).AL выглядят как украшенные рибосомами (стрелки) параллельные участки ER, содержащие NPC, которые морфологически напоминают NPC в NE при данном разрешении.

(B – B ″) Обзорные (B и B ‘) и более крупные микрофотографии (B ″), полученные с помощью корреляционной световой и электронной микроскопии (CLEM), показывающие вставку AL в NE (см. Также C). Флуоресценция RFP :: Nup107 сконцентрирована вдоль NE и на AL-NPC (стрелка в B и B ‘, AL в B ″). Изображения световой микроскопии и электронные микрофотографии на одном и том же срезе коррелируют с His2A :: GFP в ядре и автофлуоресценцией митохондрий в GFP-канале (B ‘).

(C – C ‘) Отдельный срез (C) и визуализация изоповерхности (C’) объема, полученного с помощью сканирующей электронной микроскопии сфокусированным ионным пучком (FIB-SEM), демонстрирующая взаимосвязь уложенных друг на друга листов AL мембраны (черный ящик в C), ориентированные параллельно NE (C и C ′). AL-мембраны соединяются с NE рядом с отверстиями NE.

(D – F) ТЕМ-срезы, изображающие избыточные участки мембраны NE, которые разветвляются внутрь ядра (красные стрелки на D – F). Обратите внимание на избыточный NPC, содержащий мембранный лист, рядом с отверстием NE в (D).На (F) вставляющийся NPC, содержащий растяжение ER (желтая стрелка), близок к избыточному ветвлению NE в нуклеоплазму (красная стрелка).

Кольчатые ламеллы встречаются по всему эмбриону, относящиеся к

(A) Прошитые электронные микрофотографии (ПЭМ) всего Drosophila синцитиального зародыша бластодермы в интерфазе, показывая периферические ядра (стрелки) и внутренние области, близкие к ядрам желтка. AL расположены близко к кортикальным ядрам, но также далеки от делящихся кортикальных ядер (синие прямоугольники).

(B – B ″) При большем увеличении области с синей рамкой на (A) показаны AL с NPC на параллельных листах мембраны (желтые рамки).

Ограничением вышеупомянутого анализа является то, что он разрешает мембраны только тогда, когда они примерно выровнены параллельно электронной оптической оси и, таким образом, проявляются в виде проекции на электронных микрофотографиях. Поскольку AL принимает различные ориентации по отношению к NE, относительно маловероятно захватить обе в благоприятной двумерной проекции.Чтобы лучше разрешить вставку листов AL в 3D, мы использовали технику среза и просмотра, в которой сфокусированный под низким углом ионный пучок используется для фрезерования тонких (5–10 нм) слоев внедренного образца, чередующихся с получением изображения сфокусированным ионным пучком. -сканирующая электронная микроскопия (FIB-SEM). Результирующие объемы имеют почти изотропное разрешение и могут виртуально вращаться для получения срезов практически в любом пространственном направлении. Сначала мы подтвердили, что параллельные AL-NPC-декорированные ER листы действительно сильно взаимосвязаны в трех измерениях и связаны с NE рядом с отверстиями ядерной мембраны (C ″).NE-отверстия были частыми и удивительно большими (D и 3E). Путем тангенциального разрезания NE по объемам, полученным с помощью FIB-SEM, мы могли разрешить вставку AL-листов как части отсека ER, который заключал большие части соответствующего отверстия NE и содержал NPC (F – 3F ″ и 3G). Мы пришли к выводу, что вставка AL обычно происходит вблизи отверстий NE.

Трехмерные данные позволили нам вывести предполагаемые топологические промежуточные звенья AL-вставки. Они включают установление мембранных соединений от соседнего листа к ядерным мембранам и в непосредственной близости от отверстий существующего NE.NE-отверстия могут образовываться de novo или сохраняться из предыдущего митоза (A и 4A ‘). Важно, что их существование предлагает модель поглощения AL, которая элегантно решает топологическую загадку: отверстия NE связывают INM с вставляемым листом и преобразуют последний в NE (F, 3G и A). Под воздействием ядерной экспансии как принятый «новый», так и лежащий в основе «ранее присутствующий» лист NE сдвигаются в боковом направлении друг от друга и увеличивают ядерную поверхность (A и 4B ‘). Эти топологические промежуточные соединения можно рассматривать как часть пространственно-временного континуума мембран AL и NE.Эта модель предсказывает, что в результате вставки AL (A и 4B ‘) должны появиться избыточные части NE. Мы действительно смогли подтвердить существование NPC-декорированных, повторяющихся мембран NE на микрофотографиях (D – S5F), а также нуклеоплазматических фокусов GFP :: Nup107 в живой микроскопии (C). Такой избыточный NE может быть устранен либо путем деления, либо повторной вставкой аналогично вставке AL из цитоплазмы.

Модель вставки AL-NPC

(A – B ‘) Планарная (A и A’) или трехмерная (B и B ‘) модель для вставки AL-NPC, как видно из электронных микрофотографий.Вставка включает установление мембранных соединений от вставляемого листа ER, содержащего AL-NPC, к NE и открытие NE, смежного с подключенным листом ER. Отверстия NE могут возникать de novo по неизвестному механизму (A) или, альтернативно, могут оставаться от предыдущего раунда митоза (A ‘). Связанный лист ER (стрелка на B) становится частью NE, в то время как ядерная поверхность увеличивается за счет латеральной диссипации внутри связанных мембранных плоскостей. Поскольку поры ограничивают латеральное рассеивание мембраны, NE-NPC, расположенные между отверстием NE и соединением AL-листа, предсказывают образование переходных избыточных участков NE (A и B ‘).

(C и C ‘) Барьер проницаемости NE будет нарушен, если вставка листов ER не сможет полностью окружить (или в достаточной степени «защитить») отверстие NE от цитоплазмы (C). Альтернативно, приток цитоплазмы через отверстие NE не будет происходить в скрытом отсеке (C ‘).

Регулирование развития NPC. Организация и внедрение

(A – D) Боковая мобильность и организация NPC изменяются в процессе разработки. Репрезентативные кадры вида сверху (A – D) и кимограммы (A ‘и B’) покадровых видеороликов, отображающих GFP :: Nup107 в синцитиальных эмбрионах (A, A ‘и C) или перед началом гаструляции в интерфазе 14 (B, B ′ и D).GFP :: Nup107 в NE был фотообесцвечен (стрелки в A ‘и B’) в изображенных оранжевых областях интереса (ROI) (A и B) и восстановлен в ядрах синцитиальной бластодермы (A ‘), но не в ядрах из интерфаза 14 эмбрионов (B ‘). Для обоих кимографов соответствующие области интереса выделены красным в (A) и (B). (C и D) GFP :: Nup107 равномерно распределяется вдоль NE в сферических ядрах синцитиальных эмбрионов (C), но оказывается сгруппированным по краю ядер неправильной формы в начале гаструляции (D).

(E) Кластеризация пор индуцируется зиготически.Вид сверху кадра из фильма, на котором запечатлен GFP :: Nup107, экспрессирующий эмбрион в интерфазе 14, инъецированный α-аманитином, где ядра остаются круглыми, а поры не сгруппированы из-за ингибирования активации зиготического гена.

(F – G) Зиготически индуцированный ген LBR достаточен для кластеризации NPC и увеличения размера AL. (F и F ‘) Кадры вида сверху двух синцитиальных эмбрионов бластодермы, у которых экспрессия LBR была вызвана материнской причиной. NPC, меченные WGA, появляются сгруппированными вдоль NE (F), подобно эмбрионам дикого типа в интерфазе 14 (B и D), и накапливаются в более крупных AL-NPC (F ‘) (стрелки).(G) Гистограмма размеров AL-NPC, измеренных по изображениям, как показано на (C и F ‘). AL-NPCs больше у эмбрионов бластодермы, у которых экспрессия LBR была эктопически индуцирована (n = 282 AL), по сравнению с контрольными эмбрионами (n = 282).

(H) Режим вставки NPC контролируется развитием. Плотность NPC вдоль NE определяли из средних интенсивностей флуоресценции GFP :: Nup107 или флуоресцентно меченного WGA, которые были нормализованы и нанесены на график как функция межфазной прогрессии. Плотность NPC оставалась почти постоянной в синцитиальных интерфазах, но сильно снижалась в интерфазе 14 (см. Также C).На графике показаны средние интенсивности флуоресценции ± стандартное отклонение для ~ 10 ядер от каждого отображаемого синцитиального бластодермы (n = 5) или клеточного эмбриона (n = 4).

(I) Во время интерфазы 14 AL-NPC уменьшались в соматическом ядерном слое в коре эмбриона, но не в полюсных клетках.

См. Также.

Барьер проницаемости NE сохраняется во время вставки AL

Очевидные отверстия NE предполагают нарушение барьера проницаемости между нуклеоплазмой и цитозолем, за исключением того, что отверстия NE будут находиться в компартменте, который полностью окружен мембранами ER ( C и 4C ′).Данные электронной микроскопии (C ‘и 3G) подчеркивают топологическую сложность вставки AL и показывают, что одно и то же событие может охватывать значительную часть площади поверхности ядра. Таким образом, в конечном итоге невозможно сделать вывод из трехмерных данных, остается ли NE топологически закрытым во время вставки AL. Поэтому мы решили экспериментально проверить, можно ли поддерживать проницаемость NE, несмотря на слияние AL. Мы визуализировали эмбрионы бластодермы, экспрессирующие GFP :: Nup107, которым вводили флуоресцентно меченные декстраны разной молекулярной массы (Lénárt and Ellenberg, 2006).Небольшие декстраны 10 и 25 кДа не исключались NPC и диффундировали в нуклеоплазму во время интерфазы (A и 5A ‘). Напротив, ядра были непроницаемыми для декстрана 155 кДа (A ″), что указывает на неповрежденный барьер. Важно отметить, что декстран 155 кДа даже не просачивается в нуклеоплазму, когда AL вставляется в NE (B-5B ″ и 5E; Movie S5), демонстрируя, что вставка AL не нарушает барьер проницаемости ядерных мембран.

Барьер проницаемости NE поддерживается во время вставки AL

(A) Кимографы из покадровой видеозаписи, записанные в синцитиальных эмбрионах бластодермы, экспрессирующих GFP :: Nup107, которым инъецировали флуоресцентно меченые декстраны различной молекулярной массы.Области интереса (ROI) для кимографов охватывают целые ядра, как схематически изображено. NE проницаем для декстрана 10 кДа (A) и 25 кДа (A ‘), но не для декстрана 155 кДа (A ″).

(B – B ″) NE остается непроницаемым после AL-вставки. Кимографы (схема) покадровой видеозаписи, отображающей эмбрион, экспрессирующий GFP :: Nup107 (B и B ‘), инъецированный декстраном-155 кДа-TRITC (B и B ″). Декстран остается цитоплазматическим после введения меченных GFP :: Nup107 AL-NPC (стрелка). Цветные области интереса относятся к графику в (E).

(C – E) Лазерное прокалывание NE нарушает его барьер проницаемости. (C) Кадр сверху кадра покадровой видеозаписи, на которой показан GFP :: Nup107, экспрессирующий синцитиальный эмбрион, инъецированный декстраном-155 кДа-TRITC, где NE двух ядер был проколот лазером одновременно (обозначено стрелкой и звездочкой, соответственно) . (C ‘) Кимограмма соответствующего фильма по ROI (белое поле в C). Декстран проникает в нуклеоплазму проколотого ядра (стрелки на C и C ‘), но не в соседнее контрольное ядро.(C ″) Количественная оценка средней интенсивности флуоресценции декстрана-TRITC ± стандартное отклонение для соответствующих областей интереса, обозначенных цветом на (C). Декстран накапливается в нуклеоплазме ядер в течение ~ 20 с после пункции с начальной кинетикой, не зависящей от размера области пункции. (D) Типичный кимограф для GFP :: Nup107 (D ‘) и декстрана-155 кДа-TRITC (D ″) после NE-пункции; цветные области интереса относятся к графику в (E). (E) Декстран просачивается в нуклеоплазму при пункции NE, но не при вставке AL в NE.Количественное определение притока декстрана после пункции NE и вставки AL. Уровни GFP :: Nup107 и 155 кДа-декстран-TRITC были выведены из их соответствующих интенсивностей флуоресценции, определенных при сканировании линий на ROI в кимографах, как показано на (B ‘), (B ″), (D’) и (D ″. ). Средние интенсивности флуоресценции ± стандартное отклонение нанесены на график как функция расстояния от NE для контрольных ядер (без вставки, n = 10 ядер), ядер со вставками AL-NPC (n = 7) или проколотых ядер (n = 7). Эксперименты были согласованы по соответствующему максимальному значению интенсивности GFP :: Nup107, очерчивая положение NE.

См. Также фильмы S5 и S6.

Чтобы проверить, может ли отверстие NE наблюдаемого размера в принципе вызывать приток декстрана, мы искусственно разорвали ядерные мембраны, выполнив лазерную нанохирургию на NE. Используя GFP :: Nup107, мы нацелили NE с 950 нм титановым сапфировым лазером и прокололи ядерные мембраны (C – 5C ″; Movie S6). Успешная пункция отражалась сильной механической реакцией всего ядра, проявляющейся в сворачивании и кувырке NE (Movie S6). Поразительно, что 155 кДа-декстран накапливался в нуклеоплазме проколотых ядер в течение десятков секунд (C ‘и 5C ″; Movie S6) с кинетикой, которая не зависела от размера проколотого участка (C ″).Эти эксперименты убедительно демонстрируют, что барьер проницаемости NE был нарушен после лазерно-индуцированного разрыва, в то время как он не был нарушен при вставке AL (E), несмотря на сопоставимые размеры соответствующих отверстий NE, видимых на электронных микрофотографиях (E). Эти результаты согласуются с нашей топологической моделью и предполагают, что отверстия NE полностью окружены листами мембраны ER.

Изменение организации и режима вставки NPC во время развития

В линиях клеток млекопитающих NPC стационарно встроены в NE, но подвижны вдоль мембран ER в AL (Daigle et al., 2001). Наши результаты демонстрируют частые вставки AL в эмбрионы бластодермы и указывают на то, что AL-NPCs преимущественно вносят вклад в увеличение числа NE-NPC во время экспансии ядра. Боковая подвижность NPCs внутри NE может способствовать их перераспределению после вставки AL. Таким образом, мы провели эксперименты с FRAP на эмбрионах, экспрессирующих GFP :: Nup107, чтобы проверить, стал ли AL-NPC неподвижным после вставки NE. Поразительно, что мы наблюдали быстрое восстановление GFP :: Nup107 по всему ободу после фотообесцвечивания (A и 6A ‘).Вместе с нашим открытием, что материал NPC рассеивается латерально после вставки AL в NE (F – 1F ″), мы заключаем, что у Drosophila NPC синцитиальной бластодермы являются мобильными внутри NE. Напротив, флуоресценция GFP :: Nup107 не восстанавливалась после фотообесцвечивания ядер в начале гаструляции, что позволяет предположить, что дисперсия пор внутри оболочки исчезла (B и 6B ‘). Нарушение подвижности NE-NPC в этих ядрах отражается отдельными принципами организации пор вдоль NE по сравнению с ядрами у более молодых эмбрионов.GFP :: Nup107 равномерно распределяется вдоль NE эмбрионов бластодермы, но оказывается сгруппированным в отдельные устойчивые фокусы непосредственно перед тем, как эмбрионы начинают гаструлировать (C и 6D). Переключение мобильности и организации NPC совпадает с активацией зиготического генома (A). Таким образом, организация пор в NE может контролироваться зиготическими генами или связанными с транскрипцией изменениями в хроматине. В соответствии с обеими гипотезами инъекция ингибитора РНК-полимеразы α-аманитина предотвращала кластеризацию NPC на более поздних стадиях ядра (E).

Вставка NPC в контексте эмбрионального развития

(A) AL присутствуют в изобилии на протяжении ~ 120 минут синцитиального развития, но уменьшаются в кортикальном слое в интерфазе 14, одновременно с клеткализацией и активацией транскрипции при индукции зигота.

(A ‘) NE-NPCs подвижны латерально и вдоль всего NE в синцитиальной бластодерме, но иммобилизуются и группируются в NE, начиная с клеточности.

(B) В каждой предшествующей интерфазе синцитиальной бластодермы число AL колеблется в кортикальном ядерном слое в масштабе времени ~ 10 мин, со все более длинными интерфазами в каждом цикле.Число NE-NPC, обратное количеству AL-NPC, которое уменьшается в каждой интерфазе, увеличивается вместе с расширением ядерной поверхности.

(C и D) Вставка AL-NPC в NE происходит в диапазоне 1-2 мин. Он включает в себя открытый NE и групповое введение AL-NPC в проксимальный лист ER (D). Боковая подвижность позволяет NE-перераспределение вставленных NPC. Введение последующих листов ER увеличивает ядерную поверхность (C).

Ядерная пластинка, сеть белков промежуточных филаментов, которая лежит в основе NE и проецируется в нуклеоплазму метазоа, имеет решающее значение для организации и мобильности NPC в NE (Daigle et al., 2001), но др. Белки NE также могут быть важны для подвижности NPC. Сравнительный анализ протеомов изолированных ядер из бластодермы или гаструлирующих эмбрионов выявил значительное (p = 0,00024) ~ 2,5-кратное обогащение очень заметного белка INM, рецептора ламина B (LBR), в более старых ядрах (данные не показаны). В клетках млекопитающих LBR рекрутируется членом Y-комплекса ELYS / Mel28 в специфические NE-субдомены и, таким образом, может напрямую связываться с распределением NPC (Clever et al., 2012). Поразительно, что LBR отсутствовал в NE у синцитиальных эмбрионов, но стал локализоваться на краю соматических ядер во время клеточности в интерфазе 14 (A и S7B).Примечательно, что белок оставался не обнаруживаемым в NE ядер из полюсных клеток, которые являются локализованными сзади предшественниками зародышевых клеток (C и S7D). Чтобы выяснить, достаточно ли LBR для изменения организации NPC в NE, мы эктопически экспрессировали белок в эмбрионах синцитиальной бластодермы, инъецированных WGA. У этих эмбрионов поры оказались сгруппированными в NE, а ядра приобрели неправильную морфологию (F). Оба фенотипа напоминают ядра дикого типа в начале гаструляции. Поразительно, что эктопическая экспрессия LBR у ранних эмбрионов также индуцирует большие размеры AL (F ‘и 6G), подразумевая, что экспрессия LBR и кластеризация NPC противодействуют вставке AL.

NE нацеливание LBR регулируется в процессе развития, связано с

сагиттальными видами (A, A ‘, B, B’, D и D ‘) или оптическим поперечным сечением (C и C’) фиксированных эмбрионов Drosophila в стадия синцитиальной бластодермы (A и A ‘) или во время клеточной стадии в интерфазе 14 (B – D’). LBR действительно локализуется в NE в удлиненных проспективных соматических ядрах во время интерфазы 14 (B и B ‘), но не раньше (A и A’). (C и D) Нацеливание LBR на NE зависит от типа клетки. Оптическое сечение фиксированной интерфазы 14 эмбриона, окрашенного антителами против Drosophila Lamin Dm0 и LBR.Dm0 локализуется на периферии соматических ядер и расположенных сзади ядер полюсных клеток, предшественников половых клеток. LBR исключен из ядер полюсных клеток. Клетки заднего полюса окрашиваются положительно на белок Vasa, специфический маркер полюсных клеток (D и D ‘). Задний вид справа в (C и D).

Наконец, мы обнаружили разительные различия в способе вставки NPC на разных стадиях развития. В отличие от раннего эмбриона (по сравнению с C), средняя интенсивность флуоресценции либо GFP :: Nup107, либо флуоресцентно меченного WGA на краю ядра сильно снижалась по мере прохождения интерфазы 14 (H), в то время как ядра значительно увеличивали свою площадь поверхности (Fullilove и Якобсон, 1971).Интересно, что переключение в организации и встраивании NPC происходит одновременно с сообщенным (Onischenko et al., 2004, Stafstrom and Staehelin, 1984a) и наблюдаемым (D и 6I) исчезновением AL-NPCs из слоя кортикальных ядер при ранней гаструляции. В то же время AL оставался в изобилии в полюсных клетках (I), подтверждая, что ядра из предполагаемой сомы и зародышевой линии имеют разные организации NE, что согласуется с нашими результатами по дифференциальной локализации LBR (). В совокупности наши данные подтверждают, что вставка AL в NE является программой «раннего развития», которая снижается или теряется по мере созревания эмбриона ().

Обсуждение

В совокупности из наших данных вытекает следующий сценарий. AL в изобилии присутствуют в ранних эмбрионах Drosophila и преимущественно вносят вклад в поддержание постоянной плотности NE-NPC в расширяющемся NE во время интерфазы. Таким образом, количество AL в слое кортикальных ядер колеблется вместе с прогрессией последовательных интерфаз до начала глобальной транскрипции, когда AL исчезает и режим вставки NPC изменяется (A и 7B). Во время каждого начала ранних интерфаз AL-NPCs собираются аналогично NE-NPCs, но поскольку объединенная ядерная поверхность двух дочерних ядер меньше по сравнению с родительским ядром, они остаются в цитоплазме.По мере развития интерфазы AL-NPCs попадают в пул NE-NPCs вместе с мембранами ER, которые увеличивают поверхность NE во время быстрого расширения ядра (C). Вставка AL активируется отверстиями NE, которые могут либо сохраняться от предыдущего митоза, либо образовываться de novo с помощью неизвестного механизма (D). После введения AL барьер проницаемости NE остается невозмущенным, вероятно, потому, что отверстия NE полностью окружены сетью ER. Вставляющие NPC представляют собой предварительно собранные каркасы NPC, которые набирают полный набор Nups только после вставки и только после этого устанавливают транспортную компетенцию.

Почему расширяющиеся ядра синцитиальной бластодермы поддерживают постоянное количество NPC на площадь поверхности, несмотря на их транскрипционную неактивность? Можно предположить, что это связано с механическими свойствами, а также с временными ограничениями. Встраивание NPC может иметь решающее значение для обеспечения массового притока материала в нуклеоплазму во время расширения ядра (увеличения объема). Действительно, напряженная конфигурация ядер отражается их сильным механическим откликом (переворачивание NE) при разрушении NE и барьера проницаемости после лазерного прокола.Во-вторых, пакетный перенос целых каркасов NPC как неотъемлемых частей мембранных листов преодолевает описанные кинетические ограничения интерфазной сборки в клетках млекопитающих, которые несовместимы с короткими интерфазами в синцитии Drosophila (Dultz and Ellenberg, 2010). Учитывая обилие AL-NPCs и сообщаемую высокую скорость вставки NPCs в NE ооцитов Xenopus leavis (D’Angelo et al., 2006), похоже, что сходные механизмы действуют у позвоночных.Остается неясным, как генерируются достаточные количества AL, чтобы обеспечить глобальное расширение поверхности ядра в течение нескольких клеточных циклов до начала транскрипции. Однако Nups поставляются изнутри, и AL в изобилии не только в кортикальном слое ядер, но также и внутри эмбриона (A и S6B – S6B ″). Следовательно, возможность, которую необходимо учитывать, состоит в том, что источник AL-NPCs, уже генерируемый во время оогенеза, питает рост ядер по всей синцитиальной бластодерме.

Помимо своей выдающейся роли в транспорте, NE-NPC организуют ядерную периферию, очерчивая зоны активного эухроматина по сравнению с транскрипционно репрессированным гетерохроматином между порами (Ptak et al., 2014). Решающим в этом является то, что NPCs неподвижны латерально внутри NE, что, как было показано, зависит от ядерной пластинки (Daigle et al., 2001). Ламины представляют собой белки промежуточных ядерных филаментов и бывают двух основных типов: ламины B-типа встречаются повсеместно, а ламины A-типа экспрессируются исключительно при дифференцировке клеток. Оба белка участвуют в различных сетях и также влияют на скорость вставки NPC (Lenz-Böhme et al., 1997, Liu et al., 2000). Наша работа помещает организацию NPC и способ вставки пор в контекст развития.Мы предполагаем, что у Drosophila AL вставка является врожденной для самого раннего эмбриогенеза и уменьшается, когда поры сужаются латерально и группируются в NE. На этой стадии не экспрессируются ламины A-типа, и специфически экспрессируемые белки INM могут иметь решающее значение. Интересно, что формирование кластеров неподвижных пор совпадает с активацией транскрипции сотен генов при индукции зиготизма, переходом в развитии, присутствующим у всех многоклеточных животных, который сопровождается характерными изменениями в сигнатурах хроматина (Rudolph et al., 2007, Vastenhouw et al., 2010). Мы обнаруживаем, что зиготически активированный белок INM LBR, контролируемая развитием связка INM периферического гетерохроматина (Solovei et al., 2013), достаточен для преждевременной агрегации NPC в интерфазах бластодермы, когда они искусственно экспрессируются раньше в эмбриогенезе. Это также приводит к большему AL, вероятно, потому что LBR противодействует вставке AL, для которой требуется латеральная подвижность NPC. Наши данные подтверждают зиготически индуцированную регуляцию, которая связывает вставку и организацию пор, состав NE и в конечном итоге также организацию хроматина на периферии ядра.Все эти события в конечном итоге вносят вклад в преданность изначально плюрипотентных соматических ядер в отдельные клоны.

Экспериментальные процедуры

Подробные экспериментальные процедуры доступны в дополнительной информации.

Инъекции эмбрионов, визуализация в реальном времени и иммуноокрашивание

Стадийные эмбрионы обрабатывали в соответствии со стандартными протоколами и вводили конъюгированные с Alexa488 или Alexa555 WGA (100 мкг / мл, Life Technologies), α-аманитин (100 мкг / мл, Sigma) или TRITC / FITC-конъюгированные декстраны разной молекулярной массы (Lénárt and Ellenberg, 2006).Впоследствии эмбрионы были визуализированы на инвертированном конфокальном микроскопе Zeiss LSM780, оборудованном масляным иммерсионным объективом с числовой апертурой 63 × / 1,4 NA. Для иммуноокрашивания эмбрионы фиксировали в 4% формальдегиде и обрабатывали согласно стандартным протоколам.

Субклеточное фракционирование и идентификация белков с помощью масс-спектрометрии

Дехорионированные эмбрионы лизировали, ядра выделяли центрифугированием при 5000 об / мин в течение 13 минут и отделяли от прикрепленных мембран центрифугированием (45 минут, 12000 об / мин) через 1 M сахарозную подушку. .Мембраны микросом выделяли путем центрифугирования надосадочной жидкости от ядерного осадка при 40 000 об / мин в течение 45 мин. Образцы были дополнительно обработаны и проанализированы с помощью масс-спектрометрии с дробовиком, как описано ранее (Mackmull et al., 2015). Необработанные файлы для количественного анализа без меток были проанализированы с помощью MaxQuant (Cox and Mann, 2008), а спектры МС / МС были проанализированы по записям Drosophila Swiss-Prot с использованием поисковой машины Andromeda (Cox et al., 2011). Дифференциальную экспрессию белков оценивали с помощью пакета Limma.Различия в содержании белка определяли статистически с использованием критерия t Стьюдента, модерированного эмпирическим методом Байеса. Значимые регулируемые белки определялись пороговым значением log2-кратного изменения ≤ -1 или ≥1 и значения p ≤ 0,01.

Просвечивающая электронная микрофотография, FIB-SEM и визуализация с помощью корреляционной световой и электронной микроскопии

Эмбрионы замораживали под высоким давлением, замораживали и пропитывали смолой. Затем блоки были обрезаны для FIB-SEM или разрезаны на 300-нм срезы для корреляционного светового и электронного микроскопического анализа (CLEM) с использованием ультрамикротома.Для последовательной просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ) эмбрионы, залитые смолой, были обрезаны и были получены последовательные срезы на расстоянии 100 нм с толщиной срезов ~ 80 нм. Получение изображений ПЭМ выполняли на FEI Tecnai F30, оборудованном камерой Gatan US4000 CCD, работающей при 300 кВ, или FEI Biotwin, оснащенной камерой Olympus Keen View G2, работающей при 120 кВ, соответственно. Визуализацию флуоресцентной микроскопии (FM) проводили, как описано ранее (Avinoam et al., 2015, Kukulski et al., 2011). Томографию выполняли с шагом 1 ° при 4700-кратном увеличении на электронном микроскопе FEI Tecnai F30. Визуализацию FIB-SEM проводили на Auriga 60 (Zeiss) с использованием программного обеспечения Atlas3D. Наборы данных были получены с размером пикселя 5 нм и шагом 5 нм по оси z и выровнены с помощью TrakEM (Фиджи).

Вклад авторов

B.H. задумал проект, разработал и провел эксперименты, проанализировал данные и написал рукопись. M.T.M. спроектировал и провел эксперименты и проанализировал данные.P.M., P.R., K.H.B., N.S., R.S.M., A.A.P., A.N. и J.M.P. проводил эксперименты. T.L. разработанные эксперименты. Ю.С. разрабатывал эксперименты и руководил проектом. М.Б. задумал проект, разработал эксперименты, проанализировал данные, руководил проектом и написал рукопись.

KTO SI MYSLÍŠ, ŽE SOM — программирование вступенького онлайн

Všeobecne podmienky nákupu a rezervácie vstupeniek prostredníctvom internetu , platné na prevádzkach prevádzkach prevádzkovateľa Mesto Krupina.
Všeobecné záväzné podmienky vymedzujú práva predávajúceho (prevádzkovateľ) a kupujúceho (zákazník) a platia iba pri kúpe a rezervácie vstupeniek cez internet.

Rezervácia vstupeniek
ЗАКАЗНИК berie на vedomie, Ze rezervácia JE nezáväzná клинового prípade, že си vstupenky nevyzdvihne v stanovenom случае PRED začatím predstavenia, prevádzkovateľ może vstupenky uvoľniť к ďalšiemu predaju Bez ďalšieho oznámenia zákazníkovi. Stanovený čas exspirácie rezervácie je oznámený zákazníkovi ihneď po ukončení rezervácie v rezervačnom system a zároveň zaslaný e-mailom, pokiaľ bol e-mail správne zadaný.Вступления si zákazník môže vyzdvihnúť len в pokladni a to oznámením variabilného čísla rezervácie alebo svojich kontaktných údajov zadaných pri rezervácii. Zákazník môže byť vyzvaný k predloženiu svojich identifikačných dokladov personálom prevádzkovateľa za účelom kontroly.

Zákazník berie na vedomie, že súčasne si môže rezervovať vstupenky len na 1 prestavenie. Rezervovať vstupenky na alšie predstavenia môže až po ukončení rezervácie, ktorú predtým začal. Pokiaľ zákazník nedodrží tieto pokyny, prevádzkovateľ neručí za to jeho rezerváciu, napriek tomu, že zákazník obdrží email o potvrdení rezervácie.Prevádzkovateľ si vyhradzuje právo na zrušenie takejto rezervácie a to bez oznámenia zákazníkovi.

Zákazník berie na vedomie a bezvýhradne súhlasí, že ním zadané kontaktné údaje môžu byť zaznamenané v systéme za účelom neskorbošieho kontaktovania jeanovateľ. Zákazník súčasne berie na vedomie a súhlasí, že v prípade opakovanej neprebratej a neodvolanej rezervácie, mu môže byť budúca rezervácia zablokovaná. Rezerváciu je možné odvolať osobne, telefonicky alebo kliknutím na odkaz v potvrdení rezervácie.

Kupa vstupeniek
Zakúpené vstupenky prostredníctvom в Интернет môžete vrátiť иба г dôvodu, že са predstavenie г technických príčin neuskutoční (porucha на technickom zariadení, nebol dodaný пленка, nedostavil са Umelec podobne) а к maximálne сделать 7 DNI од plánovaného uskutočnenia predstavenia požadovať za nich zaplatenú finančnú hodnotu. Musíte tak urobiť písomne. Písomná žiadosť musí obsahovať názov predstavenia, dátum a čas, počet vstupeniek a cenu celkom, variabilný symbol platby a číslo účtu, на ktorý má byť zaplatená čiastá poukáka.Ак žiadosť nebude obsahovať niektorý z uvedených údajov, nebude vybavená.
В prípade, že PRI Kupe vstupeniek prostredníctvom došlo Sice в Интернете к odpísaniu Сумского г účtu заказник, эль vstupenky са nezobrazili, reklamáciu vrátenia peňazí г dôvodu neposkytnutia služby си Вы должны взять uplatniť об Banke, ktorá zákazníkovi vystavila platobnú Kartu, prostredníctvom której platba prebehla. Takéto reklamácie nemôže riešiť prevádzkovateľ.

Kupujúci, ktorý si zakúpi vstupenky prostredníctvom internetu, bez výhrad prijíma všetky ustanovenia týchto obchodných podmienok a je povinný sa nimi riadiť.

ЗАВЕРЕЧНЕ УСТАНОВЕНИЯ:

Uvedené obchodné podmienky sú platné v deň zakúpenia alebo vykonania rezervácie vstupeniek zákazníkom.

VYHLÁSENIE POSKYTOVATEĽA PLATOBNEJ SLUŽBY

Prevádzkovateľ rezervačného nákupného systému JE сполочность Ticketware SE, так sídlom Hlavná 23, 917 01 Трнава, ICO: 48298034, е-mailový Kontakt [email protected], prehlasuje, že platobné služby до platobné metódy, konkrétne platby pomocou platobných kariet a platby pomocou online bankového prevodu zaisťuje spoločnosť GoPay s.r.o. (alej len «GoPay»), sídlo Planá 67, 370 01 České Budějovice, Česká Republika, IČ: 26046768. Obchodníkom / príjemcom platieb pre GoPay je spoločnosť NewVision Money sro, so sídlánóm lidOn, 60 : 08693242, Чешская республика, электронная почта: [email protected], тел .: +421 948 842538, ktorá zabezpečuje príjem, vyúčtovanie a zasielanie platieb. Spoločnosť Ticketware SE предлагает рекламные платные карты в заступлении за своих клиентов (3.страна).

GoPay предлагает платные услуги с использованием технических средств и реализует платные трансакции на свой собственный счет.Prípadné реклама и otázky o platobných transakciách môže Platiteľ srovať priamo na GoPay prostredníctvom telefonickej linky +420 840 818 918 (po-pia 08 — 17h) nalebo pomocou ad.

Po potvrdení objednávky má Platiteľ možnosť využiť službu bankového prevodu, ktorá ho presmeruje na internetové bankovníctvo jeho banky. Platiteľ prostredníctvom internet bankingu odošle Platbu. ПРЕДВАРИТЕЛЬНАЯ ЭКСПЛУАТАЦИЯ ВСТУПЕНКИ ВСТУПЕНЬ ПО ПРИЯТИЮ ПОТРЕБЛЕНИЯ О ГРАДЕ на GoPay.

Citlivé vstupné údaje, ktoré zadáva Platiteľ do systému internetového bankovníctva sú chránené platobnými bránami bánk a nedostávajú sa do prostredia tretích strán. Spracovatelia platieb vidia iba informácie o transakcií, ktoré im banka s odoslanou transakciou oznámi.

Kliknutím na tlačidlo: «Pokračovať» potvrdzuje Platiteľ súhlas so Všeobecnými obchodnými podmienkami prevádzky. Покрачиваним на плате дава таковы предыдущие системы, так что спракован заданными контактными лучами, а также делать доби писомных выйадрений несухлясу с темто спракован.Kontaktné údaje, ktoré Platiteľ uvedie pri objednaní, slúžia výhradne prerebádzkovateľa systému nebudú poskytnuté iným subjektom s výnimkou spracovávateov platiebúsbuyupujsvádzówy »

Používateľ nesmie využívať Rezervačný nákupný systém spôsobom, ktorý от mohol znížiť Jeho hodnotu а / alebo poškodiť, upraviť, znemožniť, preťažiť alebo zhoršiť funkciu Casti а / alebo celku Rezervačného nákupného systému, či infraštruktúry Poskytovateľa zahŕňajúcej akékoľvek pasívne а / alebo aktívne prvky Infraštruktúry a / alebo sieťové zariadenia, či servery.Používatel nesmie zneužívať, blokova, modifikovať alebo inak meniť akúkoľvek časť Rezervačného a nákupného systému, alebo sa len pokúsiť Narušiť stabilituém alebok dy. Prevádzkovateľ nenesie zodpovednosť ZA prípadné neoprávnené zásahy tretích количество человек, у dôsledku COHO Tieto osoby neoprávnene získajú prístup к osobným údajom používateľa а / alebo к Jeho používateľskému účtu а / alebo к príslušnej databáze poskytovateľa Tieto údaje použijú, využijú, zneužijú alebo sprístupnia Tieto údaje tretím osobám.Akékoľvek высшие уточнения чинности могу быть trestné.

Skontrolujte si prosím zadanú e-mailovú adresu. На заданный адрес электронной почты может быть заслане объеденное и улучшенное вступление алебо по электронной почте справа потребная к выдвижению вступениек в покрытии превадзкы. Na nesprávne zadaný e-mail nie je možné uplatňovať si reklamáciu.

Welma Luus — Теннис, женщины

В качестве юниора в красной рубашке (2013-2014): участвовали во всем составе одиночных игр в течение сезона, при этом постоянно занимая первое место.1 дабл … завершила сезон успешно, одержав четыре победы в последних пяти матчах, в том числе на чемпионате ACC … решительная победа над Николь со счетом 6-2, 3-6, 7-6 (7-3) Мартинес поднял Terps до победы над NC State … победил Samantha Asch 6-4, 4-6, 6-3, чтобы помочь Terps победить № 66 Wake Forest … начал сезон с побед над Джорджем Вашингтоном и Ричмондом … в паре с Кристиной Овсепян и Наталией Бредихиной сыграют 21 матч в топе парного состава «Терпс»… добился большого успеха с Бредихиной к концу года, выиграв матчи против NC State, No. 66 Wake Forest, No. 61 Syracuse и No. 68 Princeton … объединившись с Овсепяном, чтобы одержать победы над Virginia Tech, Pittsburgh и Сент-Джонс.

Как юниор (2012-2013): Просидел весенний сезон из-за травмы … работал помощником тренера-волонтера.

Второкурсник (2011-12): Член одного из лучших парных тандемов страны с Аной Белзунце…comсобран для 15-ти командных побед в парном разряде, играя на первом месте … занимая 15-е место в национальном рейтинге ITA … заработал заявку на чемпионат NCAA в парном разряде … выиграл USTA / Титул ITA в Атлантическом регионе, чтобы заработать заявку на участие в Национальном межвузовском чемпионате USTA / ITA в закрытых помещениях … вместе с Belzunce одержали восемь побед над рейтинговыми соперниками … расстроен тогда — Нет. 5 Кристи Фриллинг и Шеннон Мэтьюз из Нотр-Дама (1/29), а затем — Нет. 2 Шинанн Фезерстоун и Лорен Макхейл из Северной Каролины (4/14)…в одиночном разряде отыграл большую часть графика конференции на четвертом месте и одержал девять побед.

Первокурсник (2010-11): Помог вывести Terps в топ-35 национального рейтинга … универсальный игрок, который участвовал во многих различных местах в линейке с 3-го до 6-го места в одиночном разряде … записал 12 побед в одиночном разряде … одержал одну из самых больших побед в сезоне для Терпов с победой со счетом 3-6, 6-4, 6-4 над Марией Фусильо из Вирджинии, занявшей 11-е место в одиночном разряде, на 5-й позиции для Мэриленда (20 марта)… также помогли выбить 11-е место в Технологическом институте Джорджии с решающей победой в матче под № 4 в одиночном разряде над Сашей Крупиной из Yellow Jacket 1-6, 6-4, 6-3 (1 апреля) … выиграла 17 раз в парном разряде. удваивается с Аной Белзунсе с процентом побед 0,739 … дуэт записал серию из семи побед в парном разряде (25 февраля — 25 марта), включая победы над тремя рейтинговыми школами

Персональные: Дочь Хенни и Розы Магдалены Луус … имеет двух братьев и сестер Анель (16) и HP (11) … оба родителя — тренеры по теннису… была атлетом по трем видам спорта: легкой атлетикой, хоккеем на траве и теннисом … бегала с препятствиями на 400 и 800 метров … играла вперед за женскую хоккейную команду Южной Африки 18U … Энди Роддик является ее спортивным героем … поступил на факультет кинезиологии в Школу общественного здравоохранения.

Учетная запись Мичиганского университета Страница

О биохимических ассоциациях FoxO3a и SirT1 со стрессоустойчивостью клеток медленно стареющего Snell dw arf Mouse

Оге Арум

904 просмотра · 821 загрузки

Секс имеет значение в здоровье и болезнях: обзор биологических половых различий с акцентом на глиому

Сьюзан Кристин Мэсси,
Паула Уитмайр,
Татум Э Дойл,
Джозеф Э. Ипполито,
Мацей М Мругала,
Леланд Су,
Питер Кэнолл,
Александр Андерсон,
Мелисса Уилсон,
Сьюзен М. Фицпатрик,
Маргарет Маккарти,
Джошуа Б. Рубин,
Кристин Р Суонсон

699 просмотров · 695 загрузок

Филогенетическое происхождение и эволюция бесклеточной кости костистых рыб: понимание функции остеоцитов в метаболизме костной ткани

Дональд Дэвен,
Франсуа Ж.Менье,
Армин Д. Шмитт,
Мэтт Фридман,
Ольга Отеро,
Роджер Б. Дж. Бенсон

1684 просмотра · 2465 загрузок

Принятие неоднородности: построение Древа жизни и будущее филогеномики

Густаво А Браво,
Александр Антонелли,
Кристин Д Бэкон,
Кшиштоф Бартошек,
Мозес Блом,
Стелла Хьюнь,
Грэм Джонс,
Л.Лэйси Ноулз,
Сангит Ламичхейни,
Томас Маркуссен,
Элен Морлон,
Луай Наклех,
Бенгт Оксельман,
Бернар Пфейл,
Александр Шлип,
Никлас Уолберг,
Фернанда Вернек,
Джон Виденхофт,
Сэнди Уиллоуз-Манро,
Скотт V Эдвардс

3649 просмотров · 2102 загрузки

Причина разлада генного дерева? Различение неполной клональной сортировки и латерального переноса генов в филогенетике

Хуатенг Хуанг,
Джит Сукумаран,
Стивен Смит,
Л.Лэйси Ноулз

1212 просмотров · 1151 загрузки

Случай ошибочной идентификации: ‘ Latvius ’ obrutus и новые дипноанцы из франца Столбово, Россия.

Том Чалландс,
Олег Лебедев,
Мэтт Фридман,
Наташа Крупина

384 просмотра · 141 загрузки

Хирургическое лечение макулярных отверстий с использованием и без использования аутологичной плазмы, богатой тромбоцитами, Международная офтальмология

Цель

Сравнить результаты лечения идиопатических полнослойных макулярных отверстий (MH) с использованием аутологичной плазмы, богатой тромбоцитами (APRP), и без нее.

Методы

Это частично ретроспективное исследование включало 152 пациента (152 глаза) с ЗГ, прооперированных в 2010–2014 гг. По традиционной технологии с внутренним ограничивающим пилингом мембран (контрольная группа), и 62 пациента (62 глаза), оперированных теми же хирургами в 2015–2017 гг. с дополнительным применением АПРП на ЗГ (группа тромбоцитов). Регистрировали до и послеоперационную остроту зрения с максимальной коррекцией (BCVA) и изучали микроструктуру сетчатки с помощью оптической когерентной томографии.Тридцать семь пациентов в группе тромбоцитов и 80 контрольных пациентов наблюдались в течение как минимум 12 месяцев (для визуальных результатов 15 контрольных пациентов наблюдались в течение 15-24 месяцев). Данные 72 контролей (72 глаза) были проанализированы ретроспективно.

Результаты

Минимальный диаметр MH в группе тромбоцитов был больше, чем в контроле: 454 ± 186 всерсус 381 ± 148 мкм ( P = 0,003). Несмотря на это, все MH в группе тромбоцитов были закрыты, тогда как в контрольной группе 11 лунок (7,2%) оставались открытыми ( P = 0.036). Окончательное среднее значение BCVA, стандартизованное по минимальному диаметру макулярного отверстия, было выше в группе тромбоцитов на 3,9 буквы ETDRS ( P = 0,012). После операции с APRP было обнаружено фовеальное гиперрефлективное поражение (предположительно глиальная пролиферация), которое сохранялось в большинстве крупных MH, но постепенно исчезало в малых и большинстве средних MH.

Заключение

Использование APRP значительно улучшает анатомические и функциональные результаты лечения идиопатических ЗГ.В очень больших MHs APRP предположительно усиливает пролиферацию глии, что обеспечивает их закрытие.

中文 翻译 ：

使用 或 不 使用 自 体 富 血小板 血浆 进行 黄斑 裂孔 的 外科 治疗

的

比较 使用 和 不 使用 体 （MHs） 方法。

152患者 ， 这些 患者 在 2010–2014 年 期间 使用 传统 技术 进行 了 内部 限制 膜 剥离 术 （对照 组） ， 以及 62 例 （62 眼） ， 由 同 外科 医师 在 2015–2017 年 进行 手术。 APRP 在 MH （血小板 组） 上 的 其他 应用。 记录 术 和 术后 最佳 矫正 （BCVA） ， 并 使用 光学 相干 断层 扫描 的 结构。 小板 组 的 37 例 患者 和 80 名 对照 者 至少 至少12 月 （视觉 效果 方面 ， 随访 15 例 接受 了 15-24 个 月）。 回顾 性 分析 72 例 对照 （72 只 眼） 的 数据。

结果

小板 组 中 MH 的 最小 直径 大于 对照454 ± 186 всерсус 381 ± 148 мкм （ P = 0.003） ， 血小板 组 中 的 所有 MH 均已 关闭 ， 而 对照 组 的 的 11 孔 （7.2 ％） 仍 保持 开放 状态 （ P = 0.036）。 用BCVA 在 血小板 组 中 高出 3.9 个 ETDRS 字母 （ P = 0,012）。 经 APRP 手术 后 ， 发现 黄斑 中心 凹 高 病变 （可能 是 神经） ， 大多数小型 和 多数 中型 MH 中 逐渐 消失。

结论

APRP 的 可 显 着 改善 特 发 MH 的 治疗 的 解剖学 和 功能 的 功能增生 ， 从而 确保 其 闭合。

— Коллин Колледж

Объявлен весенний список деканов Коллинского колледжа

28 мая 2010 г. — Коллин-колледж включил следующих студентов в список декана для
весенний семестр 2010 года.Каждый получил средний балл от 3,5 до 3,99.
при заполнении не менее 12 кредитных часов.

Получатели Dean’s List сгруппированы по городам проживания. Список декана включает:

Эддисон
Джеймс Кэмпбелл

Аллен
Алаа Али
Жан-Клод Бабин
Кевин Бадон
Элиз Бейкер
Аманда Бивер
Шеридан Биман
Линда Бенсон
Карен Боланос
Джейсон Баузер
Кейлиреигрин Браун
Пейлиреигрин Браун
Лесси Пейлирегон
Джексон Баузер
Пейлиреигрин Браун

Эми Колл
Шерри Коффман
Бриттон Коулз
Марк Кротцер
Грег Дэвис
Кайл Дероссет
Дженнифер Диллон
Роберт Доан
Кеннет Дугас
Эллисон Дюкейн
Скотт Фаррис
Ориа Осуна Джерриус
Дэниэлс
Ориа Флорес
Кларк Джордж Голд Лидия Грейс
Уволин Грэм
Мелисса Грин
Лонни Граймс
Мэтью Гроувс
Келли Ха
Уильям Хаммонд
Анна Хаммонс
Ребекка Харрис
Салман Хасан
Бейли Хазелден
Мария Хепберн
Хэпберн Джонсхаб
Джонсхаб Хаммалл
Джонсхаб
Джонсхаб
Джохабет Хамберн
Ребекка
Стефани Джос
Christopher Kaczmarski
Harjot Kaur
Tyalor Knoblock
Chelsea Lawrence
Kelley Legg
Dorian Lewis
Jiajing Li
Creston Lockerd
Gordon Long
Kelli Mannbek
Romina Martinez
Romina Martinez
80 Romina Martinez
Romina Martinez

Майкл Мерфи
Келли Мьюз
Чонья Муйалва
Мирелла Несполи
Ан Нгуен
Аморетт Оливье
Коллин Пол
Мейю Пиао
Рикардо Пинеда
Тейлор Привитт
Келси Расмуссен
Мичелли Рэрелли
Мичелли Рэсмэссен
Мичелли Рэсмэссен
Леша Шипмен
Чие-Тцу Шзу
Барбара Смит
Мишлен Смит
Эми Стиньярд
Джейсон Салливан
Сефура Темам
Сидней Терри
Маниш Тапа
Крис Уолден
Эдвард Уорд
Шон Уиден
Шулин

Анна
Алисия Кастро
Райан Коэн
Джордж Мадзима
Керошини Муругесон
Диллон Майерс
Фиона Ньорораи
Мартин Сингх
Нейлиан Смит
Бриттани Уол

Арлингтон
Джозеф Блэкберн
Меган Хейс

Обри
Сара Бойл
Родольфо Флорес
Кеннет Клувер
Акеми Штайнер

Остин
Александр Хирш

Бэгли
Кэти Смит

Блю Ридж
Мэтью Кристоффель
Тодд Дикен
Брендан Макдермотт
Тэмми Миддлтон-Олсон

Буллард
Райан Тусант

Caddo Mills
Стивен Бейтс
Эндрю Макдональд

Кембридж
Талия Кальвилло

Кэрроллтон
Рэйчел Бейкер
Кайл Брэкенбери
Дженна Критчфилд
Дэниел Эллис
Кристофер Флеминг
Эрика Харви
Нгок Хо
Мэтью Ито
Мартен Джонсон
Кэтрин Майкл Кэманда
Мартли Джонсон
Кэтрин Микелли
Кэтрин Каманда
Дженна Оули
Ханна Рахеби
Лэндон Рэндольф
Омер Рауф
Алекс Сандерс
Уильям Смит
Согол Сулеймани
Элизабет Вера
Аарон Вервилль

Селина
Мухаммед Али
Памела Беттенкур
Аманда Крейг
Джереми Крам
Рэйчел Карри
Грегори Фарлоу
Стефани Ховард
Линда Джена
Дайана Шофнер
Хиеу Транн

Торговля
Нирадж Шреста

Coppell
Эрик Сивадо

Коринф
Элисия Кристиан
Ноэль Боланос

Corsicana
Джейсон Циммерманн

Даллас
Жаклин Биллингс
Мария Брунетто
Кениша Чатман
Амелия Кристиан
Генри Кокс
Шон Денни
Стефани Эзейго
Кейли Федор
Элисон Флинт
Джеймс Фоссье Грэйвз
Грейтс Грэйвз
Гайстен Грейтс
Гайстен Грейтс
Гайстен Грейтс
Гайдман Джессика Хансен
Хизер Хэнсон
Чейз Хардинг
Дэвид Хоук
Лорен Джайлс
Бришани Кара
Мэтью Кайзер
Бретань Лэй
Дервин Лайонарди
Сьюзан Медоуз
Ронни Нгикаби
Стелла-Мэй Нвамади
Стелла-Мэй Нвамади
Стелла-Мэй Нвамади Эйприл Стрикленд
Кристин Тим
Лина Ураз
Джеффри Уилсон
Меган Райт
Дорота Залевски

Denton
Xin Lei
Soheyla Rashidyan

Fairview
Мэтью Брэдли
Кристофер Бухидар
Стефани Ромот

Фармерсвилль
Камилла Джонс
Кристин Ланье
Николас Водичка

Цветочный курган
Драгоценный белый

Форни
Тайлер Гриффит

Форт-Уэрт
Гири Рокка

Фриско
Ариэль Аллен
Грейсон Миндаль
Кайтлан Энджел
Гектор Арана
Мирна Авила
Акил Бейкер
Хосе Баррера
Пейдж Кэдделл
Кейси Камарко
Анн Софиа Патрик Риэлс Карриер
Ника Софиа Риколис Карриер
Дэвис
Райли Дэвис
Тельма Дин
Рита Дейсаркар
Эндрю Данн
Шерил Данн
Карен Элдредж
Карин Форс
Фредерик Гэддис
Морган Гилл
Стефани Гетц
Брэндон Харрис
Хессика
Джекрет Хессика
Джекрет Хессика
Джакер Хамфри
Стефани Ибанез
Джамариус Игнонт
Кристофер Келли
Деннис Керр
Фаэген Ли
Хэвун Ли
Джон Лемей
Личун Ляо
Аса ​​Линсли
Бо Лю
Виктория Лоуза
Лоуза Лоу
Мэттью Лью
Хуан-Чиец Лью
Мэттью Лью
Хуэн-Чиезян Лью
Мартин
Дженни Мартинес 9038 0 Морган МакДорман
Эрин МакГранахан
Бриттани МакКиссак
Райан Миллер
Челси Нис
Трюк Нгуен
Мелани Норрис
Хьюзан Омер
Валери Ороско
Хизер Папагеоргиу
Дженнифер Пирс80 803 Дженнифер Пирс80 Пирнифер
Пирнифер Пирс80 Powchow
Zain Premji
Hafife Raka
Kanokon Raksriaksorn
Джошуа Родригес
Лилит Саакова
Miranda Sale
Danielle Salvatore
Patricia Sammons
Camila Santana
Sunita Sapkota Chessy
3 Sama Sayeale 903 Joshua Cheess
3 Sama Sayeason 903 Colin Steger
Rachel Szeto
Sarita Thotakat
Cherie Trudeau
Nathan Trumbull
Zachary Turner
Caroline Vera
Aaron Walter
Ian Walton
Nicole Warren
Thomas Westman
Christopher Wilde
a 0 Теодор Ю
Эмилио Зедан

Гарланд
Сара Кейси
Шеннон Конт
Казанна Корнехо
Райан Гарсия
Брайан Ноулз
Пракаш Покхрел
Кевин Симмс
Таунграт Типпонг
Джи Юн
Фаримах Зомородян

Голета
Лорен Барр

Виноградная лоза
Рэйчел Робертс

Харрисон Тауншип
Миранда Митчелл

Хит
Эдуардо Арана
Девон Аргуэлло

Highland Village
Ричард Джонсон

Howe
Майкл Комптон

Ирвинг
Майкл Круз
Фиона Фернандес
Тори Гонсалес
Дэниел Салливан
Лорен Викершем

Джонсборо
Куасси Куаме

Ланкастер
Туен Буй

Лавон
Шей Хоган
Эндрю Тернер

Леонард
Сандра Артиеда
Никанор Эрнандес
Эммануэль Ядогла

Льюисвилл
Мэтью Корнелл
Ребекка Кори
Джон Каннингем
Пенни Элам
Энсли Майерс
Райан Редшоу
Ханна Стентон
Кимберли Трантам
Эмбер Вон

Маленький вяз
Антонио Агуэро
Чарльз Бейтс
Джереми Брэгг
Бриттани Кэмпбелл
Линн Каррино
Ребекка Дарланд
Ризлэйн Эльмааруф
Одри Фезер
Лора Фринско
Роандри Кимэри Эзерджа
Тэйлор Кимэминг
Тейлор Кимэминг
Тейлор Кимэминг
Тейси Гримминг
Шон Неварес
Тассио Оливейра
Кинан Палмер-Холлинс
Дуонг Фан
Лорен Шадегг
Амелия Тейлор

Лукас
Брук Кэрролл
Трентон Харрисон
Кайл Паркер
Бхавеш Патель
Натали Щеховски
Роберт Уильямс

МакКинни
Линдси Адамс
Эндрю Олбритто
Афуа Ампем
Кейтлин Анчондо
Сэмюэл Энтони
Келли Арм
Мелинда Аткинс
Майкл Бейкер
Мекделавит Байю
Бёрнтэти
Кори Беннетти
Кори Беннеттани
Челли Беннетти
Кори Беннетти 9080 Эйвери Баттс
Хе Бён
Джессика Кэмпбелл
Ши Кантрелл
Лаура Карраро
Асима Чаухан
Чихсин Чи
Исмаил Чоудри
Дейдре Колберт
Майкл Коул
Меган Коверт
Кэтрин Блейк Кронинпорт
Кэтрин Блейк Кронинпорт
Кэтрин Блейк

Элтон Флетчер
Дэвид Фоклер
Ярик Франсиско
Хосе Франко
Меган Францке
Серджио Гарсия
Кэти Голк
Колтон Гивенс
Чад Гринман
Реджина Гурунг
Катрина Холл
Джесси Херманн
Меник Херманн
Джесси Херманн
Randon Hovis
Tsao-Hsiang Hsu
Angela Hudson
Josue Jimenez
Courtney Jones
Veronica Jordan
Kirandeep Kaur
Isaac Kek
Danielle Kelldorf
Michael Kelley
Judy Kibuthu Lee
Tray
Trail
Trail
Trail
Trail
Джозеф Линдер
Миган Липпинкотт
Дэниэл Лопес-Мехиа
Ли Лорд
Лесли Лорд
Рэйчел Лунг
Рут Мэннинг
Дайанна Мантеги
Мэри Маркс
Кристина Мейстедт
Рэйли Миллер
Мэттью Кристофер Мэйстедт
Мэттью Крайст Моулесуэлла Мольхерган
Мэттью Крайст Моулесуэлла
Мэттью Крайст Моулесуэлла

Николас Наранхо
Фиби Ньюсом
Катрино Нго
Яхима Ногерас
Рэйчел Олсон
Саманта Оуэнс
Гилберт Пачеко
Алекс Паркинсон
Шабнам Патель
Эшли Принс
Аарон Рэмэсэдэ Рэпэтис
Рэмпайв
Аарон Пурди
Амвросий манта Ризос
Эндрю Робб
Пол Роби
Ванесса Рохас
Дульсе Розалес
Джейсон Райер
Джошуа Салазар
Ванесса Сальседо
Ану Санкаран
Джон Шмитц
Кейтлин Шнайдер
Шаун Шаинн Шаинн Шаинн Шаиннэд
Сунакши Сетхинед
Сунакши Сэиннэ
Ребекка Смит
Саманта Смит
Дженна Старр
Гэри Стоун
Рейналин Таллуд
Дафна Тэй
Кишан Тапа
Мехмет Токгозоглу
Аарон Уолдроп
Нельсон Уэтерфорд
Дайана Уиллисс Мануэ
Джессика Уивер
Джессика Уивер
Джессика Уивер
Джессика Уивер
Джессика Уивер
Джессика Уивер
Джессика Уивер
Джессика Уивер
Джессика Уивер
Джессика Уивер
Джессика Уивер Уильямс

Мелисса
Джон Бронк
Билли Чилтон
Эмбер Гарсия
Брэдли Путман
Уитни Штайнманн
Кристин Ву
Дженнифер Уиттманн

Мескит
Кара Ровер

Мерфи
Брэйден Бьюкенен
Кэтлин Бирнс
Эдди Коллинз
Стефани Контрераз
Рашад Далак
Йорк Дейси
Ханна Денман
Джон Дилл
Мария Морено
Гакази Мугира Натхуа
Джошуа Шацзи Мугира
Джошуа
Джошуа Арман Уильямс

Невада
Ципора Смит

Другое
Ванесса Джойнер
Энтони Кинг
Юнг Сок (Миннеаполис)

Паркер
Ричард Буй

Плано
Язен Абусад
Шрити Ачарья
Карен Акоста
Джейкоб Адкок
Мишель Акпала
Кэтрин Аллен
Омар Али
Моника Альварес-Родригес
Ассам Эндрю Тхаридри
Маниш Аджейл Аджейл
Ассам Эндрю Тхарей
Маниш Ачарья Кирил
Ассам Эндрю
Маниш Ачарья Лукас Болдридж
Мишель Бартлетт
Джина Барток
Рэйчел Бекхэм
Бьянка Белмарес
Роберт Беннерс
Меган Берри
Тереза ​​Бьянко
Лорен Биллингс
Ли Бинфорд
Сара Блэр
Светлана Бойдзен Бойд
Светлана Кейзерт Бойдан
Светлана Кейлдэмин Богдан

Кристофер Бойер
Бенджамин Брэдли
Уильям Брейк
Келли Бреннан
Лорен Берлсон
Родольфо Бустаманте
Жаклин Бирнс
Челси Каротерс
Ванесса Кодилл
Кристель Кейв
Майкл Чаппик
Срути Чаппич
Срути Чаппи Джинхи Чу
Лия Клаузен
Миккель Клиффорд
Джеймс Кун
Кевин Конналли
Александр Коннелл
Мишель Кортес
Эшли Косталс
Чарльз Коттрелл
Кортни Кокс
Терри Койер
Лайна Каннингем
Даниэля Дайрэндс
Даниэль Дайверхэм
Лорайиндер
Даниэль Дайверхэм
Лорайа
Брианна Диас
Джессика Дьеп
Шерил Дауд
Девин Дусек
Керри Иахарт
Эрин Эджемон
Стефани Эдвардс
Эйлин Эскобедо
Араш Эсфандабади
Сесилия Эстеван Фаннинг
Хосе Меинда Фаннинг
Хосе Меинда Фаннинг
Хосе Миэни Flemmons
Courtney Floyd
Linda Franklin
Anthony French
Kyle Gallagher
Martin Garcia
Christopher Garrison
Ashley Gauthreaux
Clint Gebert
Patrick Gentry
Lincy George
Erin Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Kendra Gilbert
Goodchild
Chase Gordon
Alex Granados
Maria Cabrera Granados
Christine Griggs
Luke Guiette
Tristan Gulley
Hayley Hamre
Brennan Hardy
Sarah Hashmi
Tammy Haws
Timothy Henley Hayden
Justman
Timothy Henley Hayden
Justman Jeden
Джейми Ходжес
Кэтлин Холкомб
Меган Холлингсворт
Кэтрин Холмс
Кори Хупер
Дженнифер Хорнер
Джеймс Хант
Эшли Хунзикер
Киран Хуссейн
Мелисса Хьюнх
Джуэн Инсур 903 Дженн Джин Хьюэлл
Чи-Чен Джинхвэлл
Чи-Чен Хьюнэ
Хао Цзян
Чжэнь Тинг Цзян
Мисти Джонсон
Брайан Джонс
Хизер Джонс
Квинетта Джонс
Лэнс Джадсон
Нэнси Каранджа
Чероки Кардокус
Келси Карлен
Логан Керчо Карчо
Кимор Кейес
Кимор Кейес
Шелби 9080 Кимор Керчо
Шелби 9080 Михаил Кошинс ky
Ирина Крупина
Инна Купелиан
Тимоти Лэнг
Кайл Латрей
Джесси Лоуренс
Брэндон Ле
Ги Ли
Хин-Шенг Ли
Оделлия Ли
Джон-Пол Липер
Роберт Леман
Лориса Лемон
Фрида Лемон
Анджела Лемон
Фрида Лемон
Рональд Линдер
Майкл Логан
Алиша Лоррен
Челси Мэггард
Сангита Махарджан
Эндрю Мэлони
Стеффи Мангельсдорф
Кимберли Маркаччини
Алисса Марпл
Бланка Мартинез
3 Эмристин Амритс 9080 Дана Макрайд Макдональд
Хизер Маккенни
Мэллори Мейстедт
Кезия Мганга
Уильям Миллер
Джанин Митчелл
Эмили Монтегю
Леопольд Монтгомери
Майкл Монтгомери
Тимоти Муди
Эмбер Мур
3 Дженни Мур Мур
Дженни Мур
Дженни Мур Мур 9080 Эстер М ukasa
Флоренция Muvirimi
Sogand Bahrami Negad
Кайл Нельсон
Сархад Nerway
Nicki Newell
Loan Нгуен
Меган Нгуен
Райли Нанна
Алисия Olson
Dalisa Owens
Васудеван Падманабхан
Йоджана Пандей
Дженнифер Паркер
Линда Паркер-Мур
Aliaksei Пацевич
Алекс Пелт
Кхим Фан
Пол Пипенброк
Джошуа Пирсон
Захари Пилигрим
Уильям По
Стефани Поллак
Джероми Портер
Ана Портильо
Алисия Пауэрс
Сарабек Прайс
Дэвид Пруиттала
Джон Рэйтхен
Джон Рэйтхен Рэндс
Карла Римоло
Брэндон Ринхарт
Патрик Риу
Кейтлин Робертсон
Джозеф Робертсон
Морган Роден
Габриэла Родригес
Сара Росс
Ариэль Рагглс
Джастин Рушинг
Лия Русиновиц
Саппарис Майкл Скапта
Лия Русиновиц
Саппорт
Лия Русиновиц
ten Scheler
Kelly Schneider
Joshua Schulenberg
Ashley Scott
Scotty Serio
Vivian Shaw
Nicole Shepherd
Amber Shrier
Hsiao Shzu
Holly Sims
Cameron Smith
Jefferymi Smith
Rebe Samcca
Rebe Samcca
Rebe Samcca
Кэти Сприггс
Тенелейус Сперлок
Грегори Стэнли
Райан Стернфелс
Шеннон Стаут
Скотт Стутцман
Беннет Сукальски
Кэмерон Сазерленд
Муслих Таха
Агнес Тайнерт Томас
3 Джеймс Тэлтон
Дейнерт Тэйнерт Томас
Джеймс Тэлтон
Tijerina
Jamison Tolbert
Brett Tower
Hue Tran
Racheal Travis
Ilya Tsymbalyuk
Claudia Tuite
Stacey Tullier
Craig Turner
Daniel Turner
Eleni Turner
Katie Upugdyke
Katie Upugdyke

An Vong
Umair Waheed
Jessica Walters
Vanessa Ware
Ricky Watson
Jeffrey Weaver
Leah Whittle
Austin Williams
Kassidy Wilson
Shelicia Wilson
Jourdan Winkler
Whitsen
Whitsen
Whitsen
Whitsen
Whitsen
Whitsen

Point
Сара Фирдоусали

Принстон
Сабина Бавани
Элизабет Брэдфорд
Клейтон Байром
Джулиана Камилотти
Джейкоб Шуинар
Лорен Исли
Джонатан Хейдрик
Анджело Рамирес

Проспер
Трэвис Батори
Кайл Купер
Марк Дагуман
Сехер Фадвани
Дженнифер Фриман
Аманда Лемонс
Алисса Нгуен
Тэ Парк
Канез Рахман
Самантатерсон

Providence Village
Jacqueline Urtecho

Ричардсон
Шарлотта Бакстер
Джеймс Буллингтон
Тайлер Боуза
Дайана Кампос
Сук Ю Ченг
Гайя Феррер
Кристина Гарсия
Александр Гонт
Девин Харган
Мисти Хьюджин
Мисти Хьюджин Мисти Хьюджин
Мисти Хьюджин Микуа
Мисти Хьюджин

Афефа Раза
Джеймс Рассел
Мехвиш Шейх
Сара Стаес
Кармен Тейлор
Лорен Террелл
Джессика Торнтон
Би Жан Янник Вани
Энтони Уайлдс
Бетси Самбрано

Rockwall
Amreen Fatima
Aaron Herkert
Tom Huynh
Juliet Kinyua
Yusuf Kuzu
Junfei Li
Joy Nnama

Rowlett
Wumi Awani
Felicia Doup
Christen Duran
Parisa Foroutan
Cameron Hatzmann
Christina Hoener
Mile Jivoinovici
Elizabeth Lam
Hai Ming Vin Leung
John Ruddeler Verahll
John Ruddellia

Royse City
Грэм Тешке

Sachse
Sabika Abbas
Lindsey Biggs
Felicia Boamah
John Bulo
Megan Cervantes
Matthew Costa
David Dupree
Meredith Hershey
Alyssa Isaac Stephoki
Christopher Kayhenipong
Christopher Kayhenipong
Christopher Kayhenipong
Christopher Kayhenipong
Christopher Kayhenipong
Christopher Kayhenipong
Christopher Kayhenipong
Christopher Kayhenipong Эмили Сэк

Саванна
Аарон Финнестад
Осень Фрэнсис
Кедр Шульц
Лори Тревино

Шерман
Хейли Хагер

Колония
Бриттани Агуайо
Пол Аревало
Филип Бендер
Джоанна Коули
Джеффри Гарлинг
Челси Хикс
Кристофер Лакатос
Рамита Махарджан
Рамоника Мэй
Коннер Релин Релин
Кортни
Кортни
Робин Швердт
Янтарный Снайдер
Обри Улибарри

Трентон
Эмбер Джекс

Van Alstyne
Jaclyn Baird

Webster
Эшли Симпсон

Whitewright
Huong Nguyen
Devin Williams

Whitney
Соус Натан

Виннсборо
Уильям Браун

Уайли
Асана Аруна
Джеральд Баланон
Майкл Бердшоу
Джон Борн
Эшли Брем
Бриттани Бурсик
Джеймс Кросби
Брэнди Эствик
Джейкоб Гарнер
Маргарита Гарза
Гатлин 9080 Зее
3 Маргарита Гарза
Кейтлин 9080 См. Лорен Джексон
Анджела Джеффресс
Николь Карсолич
Юньлян Лу
Мэдисон Микер
Кристин Милхерон
Хесам Мовахед
Апинья Пантэдж
Стефани Пул
Дженнифер Пума
Риз Редмонд
Данессина Риз Рэдзен Рохан
Дэнесса Ривейл
Мэллори Скотт
Киерра Смит
Мин Тан
Кристофер Веснер
Скотт Витценбург
Али Якуби

Collin College ежегодно обслуживает более 46 000 студентов, обучающихся на зачетных курсах и продолжающих обучение.
и предлагает более 100 программ на получение степени и сертификата.Единственный государственный колледж
в округе Коллин Колледж является партнером бизнеса, правительства и промышленности, обеспечивая
индивидуальное обучение и развитие рабочей силы.

.